第三章灭活剂、保护剂和免疫佐剂第一节灭活剂一、灭活与灭活剂一、灭活与灭活剂11、灭活概念、灭活概念是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主要用于生但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主要用于生产灭活疫苗；或指破坏诊断血清或待检血清中的补体活性，产灭活疫苗；或指破坏诊断血清或待检血清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。以避免补体对诊断试验的干扰作用。微生物微生物毒力毒力的灭活或的灭活或毒素毒性毒素毒性灭活或灭活或补体补体活性活性灭活灭活22、灭活方法、灭活方法物理方法（不用）物理方法（不用）化学方法（常用）化学方法（常用）33、灭活剂：、灭活剂：用于灭活微生物的化学试剂或药物称为灭活用于灭活微生物的化学试剂或药物称为灭活剂剂二、常用灭活剂的灭活机理与应用二、常用灭活剂的灭活机理与应用((一一))灭活剂种类灭活剂种类11、甲醛溶液：、甲醛溶液：①①蛋白质②核酸烷基化（不加中断剂）蛋白质②核酸烷基化（不加中断剂）22、烷化剂、烷化剂乙酰基乙烯亚胺（乙酰基乙烯亚胺（AEIAEI））二乙烯亚胺二乙烯亚胺(BEI)(BEI)缩水甘油醛（（使微生物核酸烷基化使微生物核酸烷基化,,灭活后加灭活后加2%2%硫代硫代硫酸钠中断灭活）硫酸钠中断灭活）33、苯酚（石炭酸）：用于防腐，很少用于疫苗研制、苯酚（石炭酸）：用于防腐，很少用于疫苗研制44、结晶紫：蛋白质变性。、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂）（溶于有机溶剂）用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原55、、β-β-丙酰内酯丙酰内酯病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用..注意：灭活剂对人有害，有时对皮肤粘膜有强烈刺注意：灭活剂对人有害，有时对皮肤粘膜有强烈刺激性如：甲醛、激性如：甲醛、β-β-丙酰内酯丙酰内酯甲醛溶液：•《规程》（2000）中的26种灭活疫苗•灭活机理：•灭活浓度：多数为0.1％～0.3％•灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的；必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠，以中断其反应。氨基甲基胺羧基亚甲基二醇单酯巯基亚甲基二醇甲醛醛基羟基羟基甲酚烷化剂（alkylatingagent）乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI)、缩水甘油醛•灭活机制：1.烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。2.与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。•优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。1、乙酰基乙烯亚胺（N-acetylethylenimine，AEI）•淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。•0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年•AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。•口蹄疫病毒液:终浓度0.05％，30℃8h,加2％硫代硫酸钠阻断2、二乙烯亚胺（binaryethylenimine，BEI）•市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月;•终浓度0.02%,加入2％硫代硫酸钠中断灭活。3、缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA）•大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。•本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。•0～4℃3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。4、-丙酰内酯（－propiolactone）又名羟基丙酸--内酯•无色有刺激气味的液体，水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保存•水中溶解度37％，能与丙酮、醚和氯仿任意混合•对皮肤、粘膜及眼有强刺激性，对动物有致癌性。•病毒灭活后，能保持良好的免疫原性•主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。三、影响灭活作用的因素三、影响灭活作用的因素11、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛最常用。最常用。22、微生物种类和特性、微生物种类和特性33、灭活剂浓度（一定要适合）、灭活剂浓度（一定要适合）44、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致）温...
