转化生长因子α对人肠上皮细胞增殖、细胞总RNA、总蛋白质含量的影响VIP免费

http://www.paper.edu.cn-1-转化生长因子α对人肠上皮细胞增殖、细胞总RNA、总蛋白质含量的影响1王卉，刘宁东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨（150030）E-mail：ningliu6666@yahoo.com.cn摘要：目的本实验主要探讨转化生长因子α（transforminggrowthfactorαTGF-α）对人结肠细胞生长、增殖以及细胞总RNA和总蛋白质含量的影响。方法以人结肠腺癌细胞（LoVo）为实验模型，分别添加重组人TGF-α0.1、1（接近人乳TGF-α含量最低值）、10（接近人乳TGF-α含量最高值）、100ng/mL后，观察细胞增殖能力、细胞总RNA、总蛋白质含量变化。结果添加TGF-α24小时后，细胞较对照组有明显的增殖现象，且增殖率随细胞浓度增加而呈上升趋势，并在10ng/mL时达到最大（p<0.01）。细胞总RNA含量随TGF-α浓度增加而上升为控制组的1.67倍（p<0.05）至4.20倍（p<0.01）。而100ng/mL组细胞总蛋白质含量明显高于控制组和其它各剂量组。为对照组的1.28倍（p<0.05）。结论TGF-α能够促进人肠上皮细胞细胞增殖且具有剂量依赖性，TGF-α同样能够促进人结肠上皮细胞RNA含量的增加和蛋白质的合成。关键词：转化生长因子α；LoVo细胞；增殖；RNA；蛋白质1．引言表皮生长因子（epidermalgrowthfactorEGF）、转化生长因子α(transforminggrowthfactor-alpha，TGF-α)是表皮生长因子家族（epidermalgrowthfactorEGFfamily）中最重要的两种生长因子。其中转化生长因子α是由50个氨基酸组成的多肽，与表皮生长因子在结构上有30％～40％的同源性。EGF、TGF-α均可与其共同的受体EGFR结合，从而激活后者自身的酪氨酸蛋白激酶，促使DNA合成，从而引起细胞的增殖、分化等一系列反应。大量体内体外实验均表明乳中的EGF可促进新生动物胃肠道生长发育,促进肠壁细胞DNA、RNA及蛋白质的合成,调节消化酶的分泌和活性[1]。且对人结肠细胞具有促进增殖和促细胞总RNA和总蛋白质合成的作用[2、3]。也有体外实验证实人乳中的转化生长因子α（TGF-α）对婴儿肠细胞的生长和发育具有调节作用[4]。但是并没有对于TGF-α是否能够促进人结肠细胞生长以及细胞总RNA和总蛋白质的合成的相关实验报道。本实验主要研究作为与表皮生长因子（EGF）同一家族且结构和功能均相似的转化生长因子α(TGF-α)是否同样具有促进人结肠细胞增殖，以及促细胞总RNA和总蛋白质含量增加的功能。2.材料与方法2.1材料2.1.1细胞株人结肠癌LoVo细胞株为东北农业大学乳品科学教育部重点实验室自行保存。2.1.2试剂与仪器RPMI-1640培养液为美国Gibco公司产品，胎牛血清（FBS）购自杭州四季青公司，二甲1本课题得到东北农业大学创新基金项目(200712001)的资助。http://www.paper.edu.cn-2-基亚砜（Dimethylsulfoxide,DMSO）、甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetrazolium，MTT），胰蛋白酶均购自Sigma公司。重组人生长因子α（RecombinantHumanTGF-α）英国Peprotech公司产品，UNIQ-10柱式总RNA抽提试剂盒购自上海生工生物工程有限公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术研究所，酶标仪美国BIO-RAD公司,AE-31型倒置相差显微镜美国Motic公司，3164S/N型CO2培养箱美国FormaScientific公司。2.2方法2.2.1细胞培养LoVo细胞以1.0×105密度接种于50mL塑料培养瓶中，用含10％胎牛血清1%抗生素的RPMI-1640培养液培养，置于37℃、5％CO2的二氧化碳培养箱中，3～4d后待细胞汇合成单层细胞用含0.02％EDTA、0.25％胰蛋白酶的消化液消化，并转移至新的塑料培养瓶中进行次代培养。欲进行RNA和蛋白质实验的细胞以相同密度和数量接种到各细胞培养瓶中，24h后各培养瓶换用无血清纯RPMI-1640培养液以使细胞生长同步化，24h后弃掉无血清培养液，各组换用含不同浓度重组人TGF-α培养液继续培养24h后进行实验。2.2.2MTT比色法检测细胞增殖能力选取对数生长期细胞胰蛋白酶消化，并用含10％胎牛血清的1640培养液制成单细胞悬液，以5.0×105的密度接种于96孔板内，每孔加入单细胞悬液100uL,待细胞融合率达到60%～70%时吸去原有培养液，添加含有重组人TGF-α浓度分别为0.1、1.0、10、100ng/mL的4个剂量组，并设对照组（只添加不含生长因子的培养液）、空白调零组（只添加不含...