·基础论著·糖尿病大鼠视网膜病变细胞凋亡的观察潘琳周水平郭艳茹李光伟【摘要】目的探讨早、中、晚期不同病程糖尿病(DM)大鼠视网膜病变(DR)毛细血管周细胞、内皮细胞凋亡的发生,为研究DR发病机制提供形态学依据。方法90只雄性SD大鼠随机分成正常对照组(n=30)及链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠6、9、12个月模型组(n=20)。各实验组分别按期处死10只大鼠,取眼球作视网膜消化铺片,PAS染色及核苷酸末端转移酶介导dUTP缺口翻译法(TUNEL法)特异性标记凋亡细胞,光镜下观察。结果6个月模型组,TUNEL标记法显示周细胞凋亡,但未见内皮细胞凋亡。9个月模型组,PAS染色、TUNEL标记法显示周细胞、内皮细胞均有凋亡,周细胞及内皮细胞出现核固缩、核破碎、凋亡小体形成等细胞凋亡形态学改变。12个月模型组,内皮细胞凋亡多见,部分区域每个高倍视野下可见2～3个不同时期的内皮细胞凋亡。结论DR期间内皮细胞及细胞周细胞均可发生凋亡,DR早期以周细胞凋亡为主,中晚期内皮细胞发生凋亡,并逐渐增多。【关键词】糖尿病视网膜病变;内皮细胞;周细胞;细胞凋亡ExperimentalstudyonprogrammedretinalcelldeathindiabeticratsPANLin,ZHOUShui2ping,GUOYan2ru,etal.Departmentofcellbiology,China2JapanFriendshipInstitutesofClinicalMedSci2ence,China2JapanFriendshipHospital,Beijing100029,China【Abstract】ObjectiveTodeterminetheoccurrenceofcelldeathinsituindiabetic2likeretinopathyfromthestreptozotocin(STZ)2induceddiabeticratsafter6,9,12months1Methods90maleSprague2Dawleyratswererandomlydividedintonormalcontrolgroup(n=30)anddiabeticmodelgroup1STZwereusedtoinducediabetesinrats1Ratsineachgroupwerefrequentlyexaminedwithbloodglucoseandweight,andkilledafter6,9,12months(n=20)1Thesectionspreparedfromthetrypsin2digestedretinawerestudieswithperiodicacid2schiff2hematoxylinstain.Theterminaldeoxynucleotidyltransferase2mediat2eddUTPnickendlabeling(TUNEL)reactionwasusedtodetectthepreferentiallyapoptoticDNAfrag2mentation1ResultsRetinalmicrovesselsof6monthdiabeticratsshowedTUNEL2positivepericytes,whichwereabsentincontrolrats1Retinalmicrographsof9,12monthdiabeticratsshowedpericytesandendothelialcellapoptosisrespectivelywithTUNELreactionandPASstain1At12months,thenumbersofapoptoticendothelialcellsweremore,andeachofthepicturesshowedTUNRL2positiveendothelialcellorapoptoticbodiesunderthelightmicroscope1ConclusionsThesefindingsindicatethatdiabetesleadstotheaccelerateddeathinsituofpericyteintheearlystagesofretinopathy,andwiththeadvanceofdiseasetheendothelialcellapoptosisoccurs1【Keywords】Diabeticretinopathy;Endothelialcell;Pericyte;Apoptosis糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病(DM)最常见的严重的微血管并发症。有关DR早期周细胞减少与周细胞凋亡的关系已有文献报道,而在DR早期,内皮细胞在增生的同时是否也发生凋亡?DR中、晚期大面积无细胞毛细血管形成时内皮细胞丧失的原因是否与内皮细胞凋亡有关则报道不多。本研究通过对早、中、晚不同阶段DR病变细胞凋亡的观100029北京,中日友好医院临床医学研究所细胞生物室(潘琳、郭艳茹),中医糖尿病科(周水平),内分泌科(李光伟)察,探讨DR不同病程周细胞、内皮细胞凋亡的发生现象。材料与方法一、模型制备Sprague2Dawley(SD)雄性二级大鼠90只(180～220g),中国药品生物检定所实验动物中心购买。随机分成正常对照组(30只)和模型组(60只);两组又分为6、9、12个月3组。模型组采用STZ60mg/kg腹腔一次性注射,3天后尾静脉取血测非·372·中华糖尿病杂志2004年第12卷第4期ChinJDiabetes,August2004,Vol12,No4空腹血糖大于1617mmol/L为DM造模成功。实验期共12个月,实验期间大鼠自由摄食饮水,每个月检测一次血糖和体重。二、视网膜消化铺片6、9、12个月病程时各组随机各断头处死大鼠10只,取眼球固定于4%多聚甲醛72h后,以视乳头为中心将眼球壁剪为三等份,PBS液浸泡过夜,剥离视网膜层并入3%胰酶液3...
