高二生物教学案（51）姓名班级学号课题血红蛋白的提取和分离主备：毛银兰审校：仲娟预习完成学习目标：本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。学习重点和难点：学习重点：凝胶色谱法的原理和方法。学习难点：样品的预处理预习内容一．凝胶色谱法(1)概念：凝胶色谱法也称作____________，是根据____________分离蛋白质的有效方法。(2)原理：大多数凝胶是由____________构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，____________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程____________，移动速度____________；而____________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在____________移动，路程____________。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。二．缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制____________对溶液____________的影响，维持pH基本不变。(2)配制：通常由____________种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的____________就可以制得____________缓冲液。三．电泳(1)概念：带电粒子在____________的作用下发生____________的过程。(2)原理：许多重要的生物大分子，如____________、____________等都具有____________的基团，在一定pH下，这些基团会带上____________或____________。在电场的作用下，这些带电分子会向着____________移动。电泳利用了分离样品中各种分子____________以及分子本身的____________、____________不同，使带电分子产生不同的____________，从而实现样品中各种分子的分离。四．蛋白质提取分离一般分为____________、____________、____________、____________。五．实验操作I．样品处理血红蛋白由____________肽链组成，包括两个____________和两个____________。每条肽链环绕一个____________基团，此基团可携带____________或____________。血红蛋白因含有血红素而呈现____________。(1)红细胞的洗涤①目的：去除。②方法：____________离心，如500r·min离心2min，然后用胶头吸管吸出上层透明的____________，将下层____________的红细胞液体倒入____________，再加入____________的生理盐水，缓慢搅拌____________，低速短时间离心，如此重复洗涤____________，直至上清液中没有____________，表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋白的释放：将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加____________到原血液的体积，再加40％的____________，置于____________上充分搅拌10min。(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合液离心后可观察到试管中溶液分为4层。第1层：____________的甲苯层第2层：____________的沉淀层——____________薄层固体第3层：____________的水溶液——____________透明第4层：其他杂质的____________色沉淀物将液体用____________过滤，除去____________，于____________中静置片刻后，分出下层的____________液体。(4)透析①过程：取1mL的_________溶液装入________中，将其放入盛有300mL的20mL·L的____________中(pH=____________)，透析12h。②原理：透析袋能使自由进出，而将保留在袋内。③目的：可以除去，或用于巩固练习1．用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（）A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快2．利用凝胶色谱法什么样的蛋白质先洗脱出来（）A．相对分子质量大的B．溶解度高的C．相对分子质量小的D．所带电荷多的3．亚铁血红素基因可携带（）A．一分子COB．一分子NOC．一分子O2或CO2D．一分子NO24．将经处理破裂后的红细胞混合液以2000r／min的速度离心10min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是（）A．血红蛋白、甲苯层、脂类物质层、沉淀层B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂类物质层C．脂类物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层D．甲苯层、脂类物质层、血红蛋白、沉淀层5．凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（）A．对其他分子的亲和力B．溶解度C．所带电荷...
