16基因工程（含PCR技术）和细胞工程1.近五年的全国卷高考试题中对于基因工程的考查频度较高，侧重考查基因工程的工具，操作程序与应用等。植物细胞工程的应用以及动物细胞工程技术中的核移植技术、单克隆抗体的制备也有所考查。2.本专题以非选择题的形式考查。题目常借助简洁的文字材料或流程图、结构图等考查有关基因工程、动物细胞工程的原理、技术手段等，尤为注重对教材中一些关键词的填充及对结论性语句的准确表述等。3.考纲新变化：特别提出了PCR技术，考纲6“动物的细胞培养与体细胞克隆”由I变为II，预计2018年高考可能会涉及此考点。在备考时，可以从以下4个方面入手复习：(1)列表比较法掌握限制酶、DNA连接酶和载体的作用。(2)实例分析法理解基因工程的原理和过程。(3)列表比较法理解两个不同，即植物组织培养和动物细胞培养的不同、植物体细胞杂交与动物细胞融合的不同。(4)图解法分析并掌握单克隆抗体制备过程。考点1基因工程1.几种获取目的基因方法的比较2.比较DNA复制和PCR技术3.与DNA有关的酶的归纳与比较4.将目的基因导入受体细胞的方法比较5.DNA的粗提取与鉴定的方法步骤例1.请回答以下有关基因工程的问题：(1)基因工程中切割DNA的工具酶是。DNA连接酶根据其来源不同，分为______和______。(2)利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_______。(3)是基因工程的核心步骤。启动子是识别和结合的部位，它能驱动基因转录出mRNA。(4)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是。(5)要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的方法是技术。【解题思路】(1)切割DNA的工具酶是限制性核酸内切酶(限制酶)。DNA连接酶根据来源不同分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。(2)利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。(3)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体。启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位。(4)目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法。(5)检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，需要采用DNA分子杂交技术。【答案】(1)限制性核酸内切酶(限制酶)E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶(顺序可颠倒)(2)引物(引物对)(3)基因表达载体的构建RNA聚合酶(4)农杆菌转化法(5)DNA分子杂交(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。有关基因工程概念及其工具的8个错混点(2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。(3)在切割目的基因和运载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。(4)将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端。(5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。(6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。(7)基因工程中的运载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的运载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。(8)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。考点2细胞工程6.植物组织培养的关键点(1)植物组织培养的关键①条件：离体、一定的营养物质、激素(生长素、细胞分裂素)等。②培养基状态：固体培养基(脱分化培养基、生根培养基及生芽培养基)。③体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。(2)植物激素的使用生长素/细胞分裂素的比值适中时，促进愈伤组织形成；比值高时，促进根分化、抑制芽形成；比值低时，促进芽分化、抑制根形成。(3)光照的使用脱分化阶段不需要给予光照，再分化阶段需要给予光照，以利于叶绿素的形成。7.植物体细胞杂交的关键点(1)酶解法——用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。(2)促融剂——聚乙二醇。(3)杂种细胞的形成标志——新细胞壁的形成。(4)培养为杂种植株的技术——植物组织培养。(5)培养成功的原理——细胞全能性。8.动物细胞培养的特殊条件(1)胰蛋白酶的使用：首先用胰蛋白酶处理动物的器官或组织，以制备单细胞悬液；培养过程中发生接触抑制时，同样要用胰蛋白酶使细胞分散开。(2)避免杂...
