第六章GMP中的微生物检验GMP（goodmanufacturingpractice）：生产质量管理规范空气中有大量微生物存在，种类多，分布不均匀，通常宿舍空气中含20000个/m3，街道5000个/m3，是传播疾病的主要媒介之一。室内空气的卫生标准夏季菌落总数小于1500个/m3，冬季少于4500个/m3。溶血性链球菌和绿色链球菌夏季少于26/m3，冬季少于36/m3。目前洁净厂房已成为食品和药品生产的基本要求，测定它们的物理和微生物环境条件，已成为质量控制的组成因素。微生物常常是黏附在10—20微米粒子上。因此，洁净厂房的微生物学评估是对生产环境监控的不可缺少的指标，它涉及到洁净状况，灭菌消毒状况的有效性。通过对厂房环境的微生物监督和物理分析结果，可判断在该环境中进行生产活动的可靠性。本章主要介绍GMP中空气洁净度标准、空气洁净度的微生物检测技术，包括采样计划的制定、采样位置的确定、浮游菌的测试、沉降菌的测试209E空气洁净度标准级别级别限值（μm/ft3）0.10.20.30.551357.53.01103507530.010100750300100100010007100001000070100000100000700一、空气洁净度标准1英制（粒/ft3）：美国联邦标准209E是国际上最通行最著名的洁净室标准，许多国家的洁净度分级基本参照美国标准。2公制（粒/L）：原苏联、澳大利亚标准，分三级。级别最大浓度粒径/μm浓度（粒/L）3.5≥0.53.5350≥0.53503500≥0.535003国际公制（粒/米3）：采用国际公制的有世界卫生组织（WHO）、欧共体（EEC）、德、日、英、中国。WHO和EEC标准分四级级别大于0.5μm（个/m3）大于5μm（个/m3）浮游菌（个/m3）（A）100≤35000<1（B）100≤35000<5（C）1万≤35万<2000<100（D）10万≤350万<2000<500我国的级别标准(国家食品药品监督管理局)级别尘埃最大允许数（个/m3）微生物最大允许数≥0.5μm≥5μm浮游菌（个/m3）沉降菌90mm平板[个/（皿·30min）]10035000511000035000020001003100000350000020000500103000001050000061800NA15虽然国际公制的粒/米3最有通用性，但是在计量监测仪器方面，目前还需用英制中每立方英尺颗粒数（ft3）乘35倍，或用公制中每升颗粒数乘以1000来换算。虽然，洁净室内空气含尘量与含菌量没有一定的比例关系，但一般认为微粒少的洁净室，微生物量也较少。因此，制药工业为减少微生物污染，各工序、各品种采用了不同的洁净度级别。我国的GMP药品生产各工序的空气清洁度级别主要是：不能终端高压灭菌的注射剂的调配室，100级；能终端高压灭菌的注射剂的调配室，1万级；粉针剂原料药的调配室,100级；口服液的调配室,1万级。二、洁净环境中微生物学警告水平和行动水平的建立许多制药厂对洁净环境微生物污染监督参数使用两个水平：一个是警告水平（alertlevel），一个是行动水平(actionlevel)。两个水平是依据经验资料积累形成的。以这两个水平条件下进行无菌生产的药品，其微生物学质量不会有任何问题，如果超过这两个规定的水平，就要判定会造成什么影响。1警告水平是依据从各个净化厂房或生产步骤得到的经验和资料，一个合适的数值是95%置信值（即每20个结果有一个结果超过此限度），意义是生产中净化厂房和生产步骤情况发生变化，但还未造成直接影响时发出警告。超过警告水平限度要及时监督调查，找出微生物数量增加原因，但不必进行校正工作。许多厂商制定的警告水平可分为两级,并且不同设备的警告水平也可不同。2行动水平•是批准产品的发放水平。•超过此限度将表示用这样生产步骤生产的药品，微生物质量得不到保证，超过行动水平需立即调查，并进行校正。•不同的厂房和设备行动水平都是相同的。目的是保证控制环境的一致性。但由于采样系统、培养基和培养温度不同，所得出的微生物水平的数据会不同。三、模拟生产操作步骤微生物学评估•模拟生产操作步骤微生物学评估可采用培养基灌封试验。必须在无菌生产批结束时立即进行，以证明批生产中无菌保证条件的状况。•培养基灌封试验经过3次模拟运转合格，该洁净室或控制环境的生产线微生物状况就算合格。•一般采用大豆消化酪素肉汤培养基进行灌封试验。•在20-25℃及30-35℃，各培养7天。•洁净室最重要的污染源是人员，污染率取决于无菌...
