河北省唐山市开滦第二中学高中生物5.3血红蛋白的提取与分离导学案新人教版选修1班级：姓名：小组：【学习目标】1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理【重点难点】重点：1.凝胶色谱法的原理和方法难点：1.样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填【自主学习】蛋白质的物化理性质：的形状、大小，所带电荷、溶解度、、亲和力等千差万别，由此和各种蛋白质。1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：（见课件图）分子量大的分子通过的间隙，路程，流动；分子量小的分子穿过内部，路程，流动。（2）凝胶材料：多孔性，，如葡聚糖、琼脂糖。（3）分离过程：混合物上柱→→大分子、小分子→收集→收集。＊洗脱：从色谱柱不断注入，促使的差速流动。1．2缓冲溶液（1）原理：由和组成（如，，等），调节的用量，可配制不同pH的缓冲液。（2）缓冲液作用：抵制外界对溶液pH的干扰而保持。1．3凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的不同，在电场中受到的作用力、、不同，导致在电场中的运动方向和运动速度不同。（2）分离方法：、等。（3）分离过程：在一定pH下，使带上正电或负电；加入的SDS，形成“”，使蛋白质迁移速率仅取决于。[1【问题生成】同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把问题填写在下面【师生互动、问题探讨】1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？不是。因为蛋白质的来源和性质不同，分离方法差别很大。2选择实验材料（1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白？为什么？哺乳动物血液。因为该细胞中没有细胞核，血红蛋白含量高。（2）请阅读投影资料，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回答下列问题：血液由和两部分组成。血细胞中细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是。该化合物是由和构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的基团。【课堂小结与反思】决定运动方向形成库仑力形成阻力决定运动速率电荷性质√电荷量√√分子形状√√分子大小√√2【自我检测】一．选择题1.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（）A.对其他分子的亲和力B.溶解度C.所带电荷多少D.相对分子质量的大小2.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是（）A.糖类化合物B.脂质C.蛋白质D.核酸3.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（）A.血红蛋白是有色蛋白B.红细胞无细胞核C.红细胞蛋白质含量高D.红细胞DNA含量高4.将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是（）A.甲苯B.血红蛋白水溶液C.脂溶性物质的沉淀层D.其他杂质的沉淀5.血红蛋白因含有（）而呈红色A.O2B.COC.CO2D.血红素6.下列操作正确的是（）A.分离红细胞时采用低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h7.样品的加入和洗脱的叙述正确的是（）A.先加入1ml透析后的样品B.加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出C.如果红色带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功D.洗脱时可以用缓冲液也可以用清水8.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是（）A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B.通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C.可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D.可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度9.凝胶色谱法操作正确的是（）A.将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B.将橡皮塞下部切出凹穴C.插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D.将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片10.样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面3B.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D.用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面11、血红蛋白提取实验中，样品处理的正确操作是（）A．红细胞的洗涤→血红蛋白...
