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大肠杆菌生产制备重组人胰岛素工艺VIP免费

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【活动】阅读教材“基础知识”,讨论并回答下列问题:1.:DNA,DNA2.:,,,DNA.3.:,,DNA"",DNA.4.:Ca+,CaCI2,/・5.://.!/・〖学习要求〗知道的粗提取与鉴定的原理;掌握并能分析粗提取的技术方法和要求;学会分子的鉴定方法【预习指导】在课前时间通过阅读教材、同学交流和讨论,完成下列问题,并初步巩固。一、基础知识记忆)提取生物大分子的基本思路是利用它们的理化性质的不同进行分离。.(记忆)的溶解性特点:在不同浓度溶液中溶解度不同;不溶于酒精而蛋白质溶于酒精。【思考】据图一分析:在不同浓度溶液中溶解度有何特点?在时溶解度最小;要使溶解,需要使用什么浓度?较高浓度,可使溶解;要使析出,又需要使用什么浓度?可使析出。【思考】利用不溶于酒精的原理,可以达到将和蛋白质进一步分离目的。.(记忆)的耐受性特点:蛋白酶能分解蛋白质而不能分解;在—°C时蛋白质变性沉淀而分子不变性。洗涤剂能与蛋白质结合瓦解细胞膜而不破坏分子。.(记忆)的鉴定原理当鉴定提取出的物质是否是时,需要使用二苯胺(甲基绿)进行鉴定。在沸水浴条件下,该试剂与反应,呈现(浅)蓝色。二、实验设计.(记忆)实验材料的选取:选取材料时应本着含量高、材料易得、便于提取的原则。【思考】你认为教材提供的材料中哺乳动物的血液不适合提取。.(记忆)破碎细胞,获取含的滤液:鸡血:向鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并玻棒搅拌,用纱布过滤后,收集滤液。洋葱:向研钵中加入一定量洗涤剂和食盐,搅拌研磨,用纱布过滤后,收集滤液。【思考】在以上实验中,蒸馏水的作用是使血细胞大量吸水而胀裂,洗涤剂的作用是瓦解细胞膜,食盐的作用是溶解物质。•(学会)去除滤液中的杂质:方案一:滤液f加使溶解f过滤得滤液f加蒸馏水使析出f过滤得过滤物f放到溶液中溶解f—溶解液方案二:滤液f加嫩肉粉(木瓜蛋白酶)f静置分钟f得滤液方案三:滤液f〜°C处理f过滤得滤液【思考】以上三个方案的原理分别是什么?方案一原理:在不同浓度溶液中溶解度不同;方案二原理:蛋白酶分解蛋白质,不分解;方案三原理:耐高温而蛋白质不耐高温。【思考】方案一中:“加使溶解f过滤得滤液”的目的是除去不溶(可溶、不溶)于溶液中的细胞杂质;“加蒸馏水使析出f过滤得过滤物”的目的是除去可溶(可溶、不溶)于溶液中的细胞杂质。.(记忆)的析出:滤液与等体积冷却酒精混合,静置一段时间后析出的白色丝状物就是。.(记忆)的鉴定:取支洁净的试管,编号甲、乙,各加入等量的溶液。甲中放入少量白色丝状物,使之溶解。在甲、乙试管中各加二苯胺,混合均匀。沸水浴,观察颜色变化,甲试管呈现蓝色。三、操作提示【活动】(记忆)阅读教材“操作提示”和“课题延伸”,关注下列\I■■\『—r-*-.rf注意事项:•在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固;鸡血静置或离心后除去血浆,以提高细胞悬液浓度。.实验中使用塑料烧杯和尼龙布,以免被吸附。(记忆)技术扩增的过程与细胞内的复制过程类似。【思考】填写下表:(记忆)细胞内复制条件分析条件参与的组分在分子复制中的作用模板的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成子链的原料解旋酶打开双螺旋酶聚合酶合成引物聚合酶催化合成子链;切除引物连接酶将不连续的子链连接起来能量为解螺旋和合成子链提供能量引物为聚合酶提供合成的'端起点•(理解)细胞内的复制()的结构:脱氧核苷酸分子通过一磷酸二酯键连接形成核苷酸长链,两条脱氧核苷酸长链反向平行排列并螺旋化,形成双螺旋结构。()的复制:首先,在解旋酶的作用下,由_供能,发生解旋形成两条单链。其次,在单链的丄端,在聚合酶在作用下,合成_引物。再次,在聚合酶的作用下,从引物的—'端开始合成子链。最后,聚合酶将引物切去,并合成空缺处单链,再由连接酶将不连续的子链连接起来。(记忆)分子复制的人工控制解开螺旋:在〜°C时,双螺旋打开,形成两条单链,称为变性。恢复螺旋:在〜°C左右时,两条单链重新形成双螺旋结构,称为复性。复制条件:缓冲液,模板、四种脱氧核苷酸、热稳定聚合酶、两种引物。控制仪器:―仪(温度周期性自动调节仪)。【思考】缓冲液相当细胞内的什么成分?核液。...

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