微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的1.学习微量凯氏定氮法的原理2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术（未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等）二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。此过程进行的相对较为缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化过程：2NH+HSOT（NH）SO324424含氮有机物+HSOTCO+SO+HO+NH242223蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热蒸馏，即可释放出氨气。反应方程式如下：（NH）SO+2NaOHTNaSO+2NHOH424244吸收与滴定：蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止（即滴定至蓝紫色），最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。NH+HBOTNHHBO333423NHHBO+HCLJNHCL+HBO423433三、实验试剂、材料和器材实验材料：食用面粉。实验试剂：浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.01MHCL。实验器材：凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、锥形瓶、100ml容量瓶、酸式滴定管。四、操作步骤1.消化（1）准确称取1克食用面粉，用称量纸卷好小心送入至50毫升的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上；（2）向另一烧瓶加入1ml水作空白对照；在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂）少许，浓硫酸10ml，小瓷片两粒，摇匀；（3）将烧瓶约60度角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗，在通风厨内的电炉上消化；（4）在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈；（5）待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止；（6）消化完毕，待烧瓶内容物冷却后，加蒸馏水10ml（注意慢加，边加边摇）；（7）冷却后将瓶中内容物转入100ml的容量瓶中，并用蒸馏水洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度摇匀，做上记号备用。2.蒸馏（1）蒸馏器洗净后，开放水龙头P3,使水进入A室，水放至A室球部2/3处即可。（2）取3个50ml的锥形瓶，分别加入10ml硼酸（内加有混合指示剂）。用表面皿复盖备用。（3）加样①用移液管吸取2ml消化液，小心地由漏斗D倾入B室；②取一个盛有硼酸的锥形瓶，置于M管下，使管口恰好接触硼酸溶液，用量筒从漏斗D加入30%氢氧化钠5ml,随即将P4夹紧，并往漏斗加入少量蒸惚水封闭。(4)蒸馆①用酒精灯加热，维持火力恒定，沸腾不可高于Y管口以免A室溶液从Y管倒吸，待第一滴蒸馄液从冷凝柱F顶端滴下时起，继续蒸馄5分钟；②然后将锥形瓶放低，使导管离开液面再蒸2分钟，最后用蒸馄水洗导管外壁，蒸憎完毕，取下锥形瓶准备滴定。(5)空白蒸惚①用移液管分别吸取2ml蒸馆水按上述操作步骤进行蒸馆。仪器的洗涤：3.滴定(1)蒸惚完毕，用微量酸式滴定管，以0.01mol/L盐酸标准溶样品的总氮含量（克氮％）(A一O.°1°Ox14xl00Cx1000液进行滴定锥瓶内溶液，溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色，即为终点。2）记录所用盐酸的量。4.计算若测定的样品含氮量部分只是蛋白质则：样品的总蛋白含量（克蛋白%）=（A-B）O.°100x14x625x100Cx1000式中：A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数；C为称量样品的克数:0.0100为盐酸的当量浓度（实际上,此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写）；14为氮的原子量；6.25为常数（1毫升0.1N盐酸相当于0.14毫克氮）。五、实验结果序号称量样品（g）滴定样品用去的盐酸（ml）滴定空白用去的盐酸（ml）1115.20.122115.4滴定样品用去盐酸平均值=_2=15.3（ml）士追口砧吕―人日（苦、（A—B）x0.0200x14样品的总氮含量（克氮％）=x100Cx1000二0.43%若测定的样品含氮量部分只是蛋白质，则：样品的总蛋白含量（克蛋白%）=（A—B）x0.0200x1446.25xl00、C41000=2.66%式中：A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B为滴定空白用去的盐酸平...
