细菌药敏试验及其耐药表型检测VIP专享VIP免费

细菌药物敏感试验及其耐药表型检测沙湾县人民医院检验科张伟荣抗菌药物敏感试验测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏感性试验（AntimicrobialSusceptibilityTest），简称药敏试验（AST）。药敏试验的意义预测抗菌治疗的效果；指导抗菌药物的临床应用；发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临床医生选择合适的药物，避免产生或加重细菌的耐药；监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药菌感染的发生和流行。药敏试验MIC：在与微生物生长速率有关的特定时间间隔内，通常是18～24小时，能够抑制被测菌生长的最低药物浓度。敏感性分类(CLSI的定义)敏感（Susceptible）用常规用量治疗有效常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC5倍以上。耐药（Resistance）用常规用量治疗不能抑制细菌的生长MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度敏感性分类（2）中介(Intermediate)MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗反应率低于敏感株药物生理浓集部位有效(尿-FQ)加大用药剂量可能有效药敏试验的方法学半定量…纸片扩散法(抑菌圈直径)MIC法：稀释法(肉汤、琼脂)自动化仪法抗生素连续梯度法(Etest)流式细胞仪将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。纸片扩散法（Kirby-Bauer法）纸片扩散法1.水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度4mm，直径90mm的平板；2.挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准。纸片扩散法3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液；4.然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度；5.最后沿平板内缘涂抹1周；6.平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm。纸片扩散法7.35℃孵育16～24小时量取抑菌圈直径；8.根据抑菌环的直径，按照CLSI标准判读，报告敏感、中介、耐药。12纸片扩散法－影响因素MIC接种菌量细菌生长率抗生素含量、扩散性平皿厚度温度，预孵育时间13纸片扩散法－标准化CLSI：美国实验室标准化委员会(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute)每年修订更改包括质控新药的判定标准特殊耐药性的检测14CLSI的法规规定纸片含量、接种浓度、培养基、平皿厚度、判定标准、质控；规定常规测试报告的抗生素；不同的药判定标准不同；不同的菌判定标准也不同。15常规测试并报告的药物分组(1)肠杆菌科绿脓和非肠杆菌科一级氨苄西林头孢他啶，庆大霉素头孢唑林，庆大霉素替卡西林，哌拉西林二级阿米卡星阿米卡星氨苄西林/舒巴坦头孢吡肟，头孢哌酮阿莫西林/克拉维酸氨曲南头孢呋肟，头霉素环丙沙星，亚胺培南头孢噻肟，头孢曲松替卡西林/克拉维酸环丙沙星，亚胺培南妥布霉素，复方磺胺替卡西林，哌拉西林三级氨曲南，头孢他啶头孢曲松卡那霉素，奈替米星氯霉素，奈替米星妥布霉素四环素，氯霉素16常规测试并报告的药物分组(2)葡萄球菌肠球菌一级苯唑西林，青霉素青霉素，氨苄西林二级红霉素类万古霉素克林霉素，万古霉素三级氯霉素庆大霉素17常规测试并报告的药物分组(3)流感嗜血杆菌肺炎链球菌一级氨苄西林，青霉素青霉素，红霉素复方磺胺复方磺胺二级头孢呋肟，头孢噻肟氧氟沙星，四环素头孢他啶，氯霉素万古霉素三级阿奇霉素，头孢克罗氯霉素，利福平环丙沙星，亚胺培南利福平，四环素18预报用药(一)测试药菌名推测其他药物的敏感性苯唑西林葡萄球菌所有β-内酰胺类四环素所有（除葡多西环素，米诺环素萄球菌和不动杆菌〕红霉素G＋球菌罗红霉素，克拉霉素，阿奇霉素克林霉素所有林可霉素25/2/1719预报用药(二)测试药菌名推测其他药物的敏感性氨苄西林肠球菌青霉素...