电脑桌面
添加小米粒文库到电脑桌面
安装后可以在桌面快捷访问

刘小龙-循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义VIP免费

刘小龙-循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义_第1页
1/48
刘小龙-循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义_第2页
2/48
刘小龙-循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义_第3页
3/48
循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义刘小龙,博士、研究员福建医科大学孟超肝胆医院,中国科学院海西研究院转化医学研究中心2015.06.12肿瘤诊疗的困境:早期诊断困难,错过最佳治疗时机;易复发转移,预后差;放化疗易产生耐受;缺乏有效的治疗靶点等。早诊早治,实时监控、靶向用药及个体化诊疗是提高肿瘤远期生存率、降低死亡率的关键。肿瘤诊断方法血清标志物:蛋白类(癌胚抗原,糖类抗原,甲胎蛋白等),核酸类(microRNA,LncRNA)影像学诊断(超声,CT,MRI,PET,PET-CT)循环肿瘤细胞(circulatingtumorcell,CTC)循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA,ctDNA)循环肿瘤DNA(ctDNA)人体血液循环系统中不断流动的携带一定特征(包括突变,缺少,插入,重排,拷贝数异常,甲基化等)来自肿瘤基因组的DNA片段;来源:1、来自于坏死的肿瘤细胞;2、来自于凋亡的肿瘤细胞;3、循环肿瘤细胞;4、来自于肿瘤细胞分泌的外排体;含量低,约占整个循环DNA的1%,甚至只有0.01%。ctDNA发展简史1948年首次发现人体血液中存在着循环DNA,癌症患者的循环肿瘤DNA则发现于1977年。1994年发现这些DNA含有癌症的标志性突变,证明其来自于肿瘤。鉴于肿瘤DNA会流入血液,香港中文大学的卢煜明(DennisLo)教授推测胎儿DNA应该也能进入血液。1997年证明孕妇血液中携带着男性胎儿的Y染色体。该发现允许医生们在怀孕初期通过无创方式检测胎儿的性别,甚至筛查唐氏综合症等发育疾病。这是产前诊断领域的一次革命。NatureReviewsCancer11,426-437(June2011)|doi:10.1038/nrc3066Cell-freenucleicacidsasbiomarkersincancerpatientsctDNA发展简史研究热点近10年ctDNA相关发表文章数(pubmed数据库)NEJM:4篇PNAS:7篇JAMA:1篇SciTranslMed:6篇Cancerresearch:12篇ClinCancerRes:28篇ctDNA优势无创、无损、实时、多次;当不能获得肿瘤组织信息时,可以开展“液体活检”;假阳性率低,灵敏度高,准确度高,可用于肿瘤的早期诊断;能够对肿瘤的演化和适应性改变进行监控;能够对肿瘤病人的治疗效果进行实时监控(尤其在追踪肿瘤转归、转移和复发等方面),并进行个性化的治疗方案指导(如个性化靶向药物用药,个性化化疗等)。一类具备广泛应用前景的肿瘤标志物,可无创的用于肿瘤早期诊断、发展过程监测、预后判断、以及个性化用药指导。ctDNA检测技术敏感度已知突变位点检测(突变率<2%)数字PCRBEAMing技术标记扩增深度测序(TAM-Seq)癌症个体化深度测序(CAPP-Seq)未知突变位点检测(突变率>2%)全基因组测序全外显子测序RNA末端平行分析法全基因组甲基化测序数字PCR将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中,在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板),实现“单分子模板PCR扩增”,扩增结束后,通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。阴性微滴比例推算起始靶分子的绝对量泊松分布一个待分析的PCR反应体系成千上万个独立的PCR反应体系:靶标分子:有限稀释●:阳性微滴(1)○:阴性微滴(0)泊松分布PCR扩增优点:可绝对定量,灵敏度可达单个核酸分子,检测限低至0.001%;缺点:只能检测已知的突变位点,通量低;利用数字PCR监测肺癌病人中第一次服用埃罗替尼抗肿瘤药物后的血浆EGFR突变情况。经过治疗后,所有病人的EGFR突变都出现下降,其中有8个病人突变完全消失。有6个病人的EGFR突变在后续出现上升,提前揭示疾病进展。另外3个病人的EGFR突变没有变化,病情无明显进展。数字PCR可以用于评估和监测血浆中ctDNA的特异突变结合数字PCR与流式技术,利用特异性PCR引物扩增目标突变区后,与磁珠(磁珠上固定有特异的PCR引物)混合进行油包水单分子扩增反应。反乳化作用后,利用不同颜色的荧光探针结合磁珠上的PCR产物,发出红色或绿色荧光。使用流式细胞仪分析磁珠颜色来确定突变情况。BEAMing技术利用肿瘤组织进行sanger测序定义肿瘤组织的基因突变;再利用Beaming技术检测18例癌症病人中192份血浆样本中ctDNA的突变情况,检测灵敏度可达到0.005%。术前:13.4%术后:0.015%术后(48天):0.11%术后(244天):0...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在违规,或者侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“违规举报”。

碎片内容

刘小龙-循环肿瘤DNA(ctDNA)检测策略及临床意义

确认删除?
VIP
微信客服
  • 扫码咨询
会员Q群
  • 会员专属群点击这里加入QQ群
客服邮箱
回到顶部