2025年流式细胞仪检测细胞周期原理和方法VIP免费

流式细胞仪检测细胞周期原理和办法流式细胞仪（FCM）检测细胞周期的原理和办法高考和模拟试题中经常会出现流式细胞仪检测细胞周期图像，那么，什么是流式细胞仪？如何检测细胞周期？流式细胞仪是一种在功效水平上对单细胞或其它生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它能够高速分析上万个细胞，并能同时从一种细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，含有速度快、精度高、精确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪，又称荧光激活的细胞分选器，作为进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体力学、图像技术、细胞生物学、免疫学理论于一体，是一种非常先进的检测仪器，被誉为生物医学实验室的“CT”。流式细胞术已经成为一种用途最广泛和最先进的细胞分析技术，在细胞生物学、血液学、肿瘤学、免疫学等基础和临床医学领域发挥着重要作用。流式细胞计的基本构造流式细胞计重要由流动室与液流系统、激光源与光学系统、光电管与检测系统、计算机与分析系统四部分构成（如图）。典例分析（北京高考试题）流式细胞仪可根据细胞中DNA含量的不同对细胞分别计数。研究者用某抗癌药品解决体外培养的癌细胞，24小时后用流式细胞仪检测，成果如图。对检测成果的分析错误的是A．b峰中细胞的DNA含量是a峰中的2倍B．a峰和b峰之间的细胞正进行DNA复制C．处在分裂期的细胞均被计数在a峰中D．此抗癌药品克制了癌细胞DNA的复制【答案】C【解析】从题目图中我们不难看出有两个峰值细胞的数目最多，分别对应的DNA含量为40和80。可知40的应当是处在分裂间期的G1期细胞，G1期时间比较长。而80的细胞应当是属于G2期和分裂期的细胞，DNA含量已经加倍。因此A选项中b峰中细胞的DNA含量是a峰中的2倍是对的的。B选项中a峰和b峰之间应当是细胞周期中的S期，正在进行DNA分子复制。C选项中，处在分裂期的细胞DNA含量处在加倍状态，应当计数在b峰中。D选项通过看右侧图可知b峰明显下降，可知应当是克制了DNA分子的复制，DNA加倍的细胞明显减少，因此D选项对的。流式细胞仪的检测细胞周期的原理（PI染色法）细胞周期是指细胞从一次分裂完毕开始到下一次分裂结束所经历的全过程，细胞的遗传物质复制并均等地分派给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后临时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功效（G0期）。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，普通正常细胞的G1/G0期含有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/M期含有四倍体细胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI能够与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，能够将细胞周期各时相分辨为G1/G0期，S期和G2/M期，获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。PI，即碘化丙锭，能够与细胞内DNA和RNA结合。PI不能通过细胞膜完整的细胞（如活细胞和早期凋亡细胞），在标本制备时，必须先用乙醇或其它破膜剂增强细胞膜的通透性，才干使PI进入细胞内与细胞内的核酸结合。乙醇普通为终浓度为70%的冷乙醇。如果应用于流式，采用RNA克制剂将RNA消化后，通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。固然，PI也可用于作细胞核染色，作为观察或定量细胞的办法。流式细胞仪的工作原理首先将待测细胞被制成单细胞悬液，经特异性荧光染料染色（间接免疫荧光染色或直接免疫荧光染色）后加入样品管中，在气体压力推动下进入流动室，流动室内充满鞘液，在鞘液的作用下，细胞排成单列从流动室喷嘴口喷出，并被鞘液包绕形成细胞液柱。这种同轴流动的设计，使得样品流和鞘液流形成的流束始终保持着一种分层鞘流的状态。鞘液和样品流构成一种圆形的流束，一起自喷嘴的圆形宝石孔喷射出来，进入流动室，与水平方向的激光光束垂直相交，该区称为测量区。运用样品流和鞘流的气压差的层流原理，使细胞依次排列成单行，每个细胞以均等的时间依次通过测量区，被荧...