实验一：大肠杆菌DH5α 和 BL21感受态细胞的制备【实验步骤】1 从 LB 平板上挑取新活化的大肠杆菌DH5α 单菌落，接种到5mL LB 培养基中， 37℃振荡培养过夜。2 取 1mL培养物接种到100mL LB 培养基（ 250mL三角瓶）中， 37℃振荡培养2~3h。3 将菌液转移到50mL离心管（ 2 管）中，冰上放置15min。4 4 ℃ 4000 rpm 离心 5min，弃去上清液，倒置使培养液流尽。5 用 20 mL 冷 CaCl2溶液悬浮菌体沉淀合并成一管，在4℃ 4000 rpm 离心 5min，弃去上清液。6 用 10 mL 冷 CaCl2 溶液悬浮菌体沉淀，冰浴30min。7 4 ℃ 4000 rpm 离心 5min，弃去上清液，用2 mL 的冷 CaCl2 溶液悬浮。8 分装到数个EP管中，每管200 uL ，冷冻保存备用。实验二：目的基因质粒（T-SOD或 T-IL218 ）和表达载体质粒（ PET32或 PET30）的转化及大量提取【实验步骤】一、载体的转化（无菌条件，冰上进行）1、取 200 uL 新鲜制备的感受态细胞，分别加入质粒DNA 2 uL（PET32a，IL-18 ），混匀，冰上放置 30min。2、将 EP管放到 42℃ 保温 90s，冰浴 2min 。3、加入 800uL LB 液体培养基， 37℃慢摇复苏1 h 。4、将 100 uL 的复苏细胞涂布在含有Amp（100mg/mL）的 LB 培养皿中，正置平皿30min（使菌液被培养基吸收）。5、倒置平皿37℃培养 16 h ，出现菌落。二、质粒的提取1 挑取单菌落接种于100 mL 加入 50uL Amp 的 LB 液体培养基中，振荡培养过夜。2 过夜培养的菌液加入 mL 的小指管（ 20 个每组）中，每次1 mL，4℃， 12000 rpm ，离心 1min，4 次，弃上清。3 加入 150uL 溶液Ⅰ悬浮细胞，漩涡振荡，室温静置10min。4 加入 350uL 溶液Ⅱ （新鲜配制） ，轻微颠倒混匀20 次，冰浴 5min。（不能再剧烈震荡）5 加入 300uL 溶液Ⅲ（冰上预冷），颠倒混匀20 次，不能剧烈震荡，冰浴10min。6 4 ℃， 12000 rpm ，离心 10 min ，取上清转移至另一离心管中。7 向上清中加入倍异丙醇，轻轻混匀，室温静置20 min 。8 4 ℃， 12000 rpm ，离心 10 min ，弃上清，倒扣于吸水纸上，吸净液体。9 用 1mL 70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀 2 次，每次 4℃， 12000 rpm ，离心 3min，吸去上清。10 55℃烘干至无酒精，加入 20uL TE，所有集成一管后加入RNase 1~2uL，37℃消化 1~2h，-20 ℃保存。11 电泳分析。制胶：琼脂糖，20mL 1× TBE缓冲液，...
