冰冻切片详细说明 切片技术最早期是从冰冻切片开始,后来逐步有了发展和更新,冰冻切片弥补了石蜡切片和火棉胶切片之不足,石蜡切片和火棉胶切片需时太久,且在制片中要使用许多化学试剂,石蜡切片还需要加温过程,因而某些重要的不稳定的组织成分如脂类、酶以及抗体等,可能被溶解和破坏。冰冻切片过程较简单,无须经过上述步骤,组织中的水分起着包埋剂的作用,组织经固定或不固定即可进行冰冻切片,切片厚度一般可在 6-8 微米,组织没有收缩,易保持生活时原有状态,是保存脂肪组织,许多神经组织特殊染色方法和组织化学方法,特别是酶的活性十分理想的切片方法,对于外科临床诊断和现代免疫荧光诊断,冰冻切片也很重要。其缺点是组织过大不易冰冻,连续切片困难。5 微米以下切片不易成功。但是随着现在冰冻包埋液的不断改进,已经能切出少于3 微米的切片 一、直接冰冻切片法 冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。 1.恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。目前恒冷箱切片机的品种较多。此种切片适用于科研和教学上的连续切片。要求预先开动电源(预冷准备),配多种固定组织台,以便更换组织。 2.甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制,其冷却速度比较快,属于开放式,作一般常规冰冻切片用。 3.二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后,放在冰冻切片机的冷冻台上,加蒸馏水少许。打开冷冻台的二氧化碳开关,二氧化碳气体喷出,待组织出现冷霜时,将二氧化碳关闭,即可切片。若组织冷冻过硬则切片易碎;组织冷冻硬度不足,则切片呈粥糜状,需用间歇方法继续冷却。硬度一般在刚开始解冻时最合适,应迅速切片。 4.半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上,滴加少许蒸馏水,调好切片机的厚度。先接通热器的循环流水,然后接通电源,电源的正负极切勿接反,用整流电源控制温度。 二、明胶冰冻切片法明胶包埋法一般多用于冰冻切片易破碎的组织,特别是某些有树枝状突起的组织,当其切片后投入水中时,常常引起分散,甚至发生丢失,某些间隙较多的组织,有时会因发生散乱而失去相互间的联系,可形成移位现象。明胶冰冻切片正是适用于上述情况。 ⑴环保组织固定液固定后必须充分水洗,洗净。因甲醛对明胶有凝固作用,从而影响明胶溶液浸入组织内部,不宜选用含甲醛类固定液。 ⑵组织水洗后浸入12.5%明胶水溶液(以 1%石碳...