基因工程载体VIP免费

第三章基因工程载体体外获得的任一 DNA 片段,必须插入到可以自我复制的载体内，再转入宿主细胞,才能得到复制和进行表达。基因工程载体(Vectors)就是携带外源基因进入受体细胞进行繁殖和表达的一种工具。载体的功能运送外源基因高效转入受体细胞为外源基因提供复制能力或整合能力为外源基因的扩增或表达提供必要的条件基因工程中 3 种主要类型的载体：1.质粒载体基因工程对载体的要求2.噬菌体载体3.柯斯质粒(cosmid)载体(1)在宿主细胞内能独立复制。制。(2)有选择性标记。(4)分子量小，拷贝数多。(3)有一段多克隆位点。(5)容易从宿主细胞中分离纯化。外源 DNA 插入其中不影响载体的复第一节质粒(plasmid)载体质粒是一种独立于染色体外的双链闭环的 DNA 分子，具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质，如离开宿主细胞则不能存活，而宿主即使没有它们也可以正常存活。(一) 质粒的构形环形双链的质粒 DNA 在提取过程中通常出现三种不同的构型：① 共价闭合环形 DNA(cccDNA)② 开环 DNA(opencircular,ocDNA)③ 线形 DNA(linear,lDNA)(二)质粒的转移性指质粒从一个细胞转移到另一个细胞的特性。接合型能我转移木能 II 找转楞接合型质粒：除了带有自我复制所必需的遗传信息外，还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因。如:F 质粒(性质粒或 F 因子)甚至能使寄主染色体上的基因随其一道转移到原先不存在该质粒的受体菌中。不符合基因工程的安全要求。非接合型质粒：带有自我复制所必需的遗传信息，但失去了控制细菌配对和质粒接合转移的基因，因而不能从一个细胞转移到另一个细胞。如 R 质粒(抗性质粒)、Col 质粒(细菌素质粒)。符合基因工程的安全要求。R 质粒：带有一种或数种抗生素抗性基因，使寄主获得同样的抗生素抗性性状(resistance)。Col 质粒：细菌素通过与敏感细菌细胞壁的结合作用，抑制一种或数种细胞生命过程。带有控制大肠杆菌素(colicin)合成的基因。大肠杆菌素对不带 Col 质粒的大肠杆菌有毒。Col 质粒或 R 质粒如果带有转移基因，也可以成为接合型质粒。某些非接合型质粒(ColEl)在接合型质粒的存在和协助下也能 DNA 转移，这个过程由 bom 和 mob 基因决定。(三)质粒的复制类型1•严紧型质粒(stringentplasmid)低拷贝数，有 1~3 份的拷贝；(接合型质粒分子量大，一般属严紧型)2.松弛型质粒(r...