细胞工程实验方案设计题目：小鼠肾脏上皮细胞系的建立设计者：班级生物 1101 姓名马聪冲学号 20113087 指导教师：陈晓明日期： 2013 年 11 月 11 日西南科技大学生命科学与工程学院目 录一、基本原理（一）基本概念二、准备工作（一）实验所需试剂与材料（二）实验所需的器材与设备（三）基本用液的配置（四）器材清洗、干燥与消毒三、实验步骤（一）取材（二）原代培养（三）传代培养（四）细胞纯化（五）细胞系的建立（六）细胞冷冻保存（七）冻存细胞的复苏四、注意事项小鼠肾脏上皮细胞系的建立一基本原理动物细胞培养（ animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 这个实验方案就是选取小鼠肾脏上皮利用动物细胞培养技术建立细胞系。二 准备工作1. 实验所需的试剂与材料健康小鼠、火柴、酒精灯、青霉素、链霉素、胰蛋白酶、EDTA、稀盐酸、蒸馏水、20%新洁尔灭、 70%乙醇、D-Hanks液、甲醛、高锰酸钾、 甘油、滤纸、0.22 滤膜、台盼蓝、培养基成分（见表）2. 实验所需器材与设备培养皿、镊子、手术刀、手术剪刀、小烧杯、吸管、三角瓶、棉球、细胞计数板、滤器、毛刷、超净工作台、紫外灯、液氮、冻存管、溶液瓶、量筒、毛帕、脸盆、一次性手套3. 基本用液的配置RPMI-1640培养基的制备与消毒序号化合物名称含量 (mg/L) 序号化合物名称含量 (mg/L) 1 L- 精氨酸290.00 21 硝酸钙100.00 2 L- 门冬酰胺50.00 22 无水硫酸镁48.84 3 L- 门冬氨酸20.00 23 无水磷酸二氢钠676.13 4 L- 胱氨酸二盐酸盐65.15 24 氯化钾400.00 5 L- 谷氨酸20.00 25 氯化钠6000.00 6 甘氨酸10.00 26 葡萄糖2000.00 7 L- 组氨酸15.00 27 还原谷胱甘肽1.00 8 L- 羟脯氨酸20.00 28 酚红5.00 9 L- 异亮氨酸50.00 29 L- 谷氨酰胺300.00 10 L- 亮氨酸50.00 30 生物素0.20 11 L- 赖氨酸盐酸盐40.00 31 D-泛酸钙0.25 12 L- 甲硫氨酸15.00 32 叶酸1.00 13 L- 苯丙氨酸15.00 33 i- 肌醇35.00 14 L- 脯氨酸20.00 34 烟酰胺1.00 15 L- 丝氨酸30.00 35 氯化胆碱3.00 16 L- 苏氨酸20.00 36 盐酸吡哆醇1.00 17 L- 色氨酸5.00 37 核黄素0.20 18 L- 酪氨酸23.19 38 盐酸硫胺素1.00 19 L- 缬氨酸20.00 39 维生素 B 12 0.005 20 对氨基苯甲酸1....
