口腔生物学实验基础医学院病原生物学教研室杨致邦2010.1教材高等医学院校基础医学实验教学系列教材≪病原生物学实验≫科学出版社,2008年6月主编杨致邦叶彬实验内容及安排实验课内容学时数显微镜录像1牙菌斑细菌检查5需要2ELISA法检测血清HBsAg5需要3饮用水氟含量测定4有实验一牙菌斑细菌检查(P161)[实验目的]1.掌握牙菌斑涂片的刚果红负性染色法;2.熟悉口腔细菌的形态,染色性;3.了解口腔厌氧菌培养方法。【实验内容】1.牙菌斑刚果红负性染色检查法2.牙菌斑细菌培养1.牙菌斑刚果红负性染色检查法[实验材料]牙纤、牙垢、2%刚果红、37%的浓HCL、显微镜、载玻片、香柏油、二甲苯。【实验方法】(1)标本采集用牙纤挑取牙菌斑(牙缝接近牙龋处)的牙垢。(2)刚果红负性染色法载玻片上滴加2%刚果红溶液2滴加入标本,用牙鉴将标本与染液混匀推片自然干燥置浓HCL(37%)蒸汽上熏,呈蓝色即可油镜观察[实验结果]油镜下可见背景呈蓝(黄)色、细菌及其它微生物呈光亮的白色,形态清晰,呈不同的形态:球状、杆状、螺旋状等。[注意事项](1)一定要将菌斑与染液混匀,否则就不能将细菌分散。(2)用HCL蒸汽熏时,皮肤一定不要接触浓HCL,否则会被烧伤。[实验材料]1.牙纤、牙垢、硫乙醇酸盐稀释液(分装成1ml)、厌氧血平板、产气袋、金属钯、厌氧罐。2.牙菌斑细菌培养2.生理盐水、革蓝染色液,显微镜、载玻片、接种环、牙纤、香柏油、二甲苯。[实验方法]用牙纤挑取少许牙垢在塑料离心管中加入0.5ml硫乙醇酸盐稀释液震荡1-2分钟用稀释液对倍稀释为1:10、1:20、1:40取1:20、1:40稀释液各2-3环接种厌氧血平板在厌氧罐中放入产气袋,加约10ml水将接种后的厌氧血平板放入厌氧罐中,迅速盖好37℃培养3天后观察1.厌氧菌培养2.耐氧试验观察培养3天后的厌氧血平板,将不同菌落编号后,同时分别接种两个厌氧血平板,1个置培养箱中常规培养,1个置厌氧培养,3天后观察。3.厌氧菌鉴定以厌氧培养生长,而常规培养不生长的细菌判为厌氧菌。若两者均生长判为兼性厌氧菌,有条件可作进一步鉴定。[注意事项]1.确保厌氧罐不漏气。2.产气袋加入水后会很快产生氢气,需迅速盖好厌氧罐。[实验报告]记录牙菌斑刚果红负性染色检查试验结果,讨论牙菌斑对龋病形成的影响。请班干部填写实验运行记录,安排做好清洁卫生。谢谢!