Real-time qPCR 手册---手把手教你从菜鸟到高手 由于Real-time qPCR 的众多优点,现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR 的实验,也基本上被real-time qPCR 所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的由于Real-time qPCR 的众多优点,现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR 的实验,也基本上被real-time qPCR 所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测,很多没有做过real-time qPCR 的研究者常常感到高深莫测,不知从何入手;甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑,不知所措。 本文就从real-time qPCR 的发展史说起,包括real-time qPCR 的原理,实验设计,实际操作,数据分析,常见问题解答五个方面,手把手教你从各个方面了解real-time qPCR ,彻底的从菜鸟到高手! 一、Real-time qPCR 发展史 Real-time qPCR 就是在PCR 扩增过程中,通过荧光信号,对PCR 进程进行实时检测。由于在PCR 扩增的指数时期,模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。由于常规的PCR 的缺点,real-time qPCR 由于其操作简便,灵敏度高,重复性好等优点发展非常迅速。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域,比如基因的差异表达分析,SNP 检测,等位基因的检测,药物开发,临床诊断,转基因研究等。 在Real-time qPCR 技术的发展过程中,定量 PCR 仪的发展起了至关重要的作用。1995 年,美国 PE 公司(已经并入Inv itrogen 公司)成功研制了Taqman 技术,1996 年推出了首台荧光定量 PCR 检测系统,通过检测每个循环的荧光强度,通过Ct 值进行数据分析。从而荧光定量 PCR 获得广泛应用。现在的定量 PCR 仪有ABI7000、7300、7500,7700、7900HT、StepOnePlu sTM、StepOneTM、PRISM@StepOneTM 系列;BIO-RAD 的CFX96、iCy cler iQ5@、My iQ@、MJ Research Chromo4TM Opticon 系列;StratageneMx TM 系列;Roche LightCy cler@系列;EppendorfMasercy cler@;Corbett Rotor-GeneTM;Cepheid SmartCy cler@和 BIOER 的LineGene 系列。 随国内生命科学的快速发展,科研水平不断提高,发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时,国内公司经过长期不懈的努力,也有自主研发的real-time PCR 仪器生产比如西安天隆科技公司的TL 系列仪器。 二、...