SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理VIP免费

聚 丙 烯 酰 氨 凝 胶 电 泳 作 用 原 理 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 是 网 状 结 构 ， 具 有 分 子 筛 效 应 ， 它 有 两 种 形 式 ， 一 种 是非 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 ， 蛋 白 质 在 电 泳 中 保 持 完 整 的 状 态 ， 蛋 白 在 其 中 依 三 种 因素 分 开 ： 蛋 白 大 小 ， 形 状 和 电 荷 。 而 SDS-PAGE仅 根 据 蛋 白 分 子 量 亚 基 的 不 同 而 分 离 蛋 白 。 这 个 技 术 首 先 是1967年 由 shapiro建 立 ， 他 们 发 现 在 样 品 介 质 和 丙 烯 酰 胺 凝 胶 中 加 入 离 子 去 污剂 和 强 还 原 剂 后 ， 蛋 白 质 亚 基 的 电 泳 迁 移 率 主 要 取 决 于 亚 基 分 子 量 的 大 小 ， 电 荷因 素 可 以 忽 视 。 SDS是 阴 离 子 去 污 剂 ， 作 为 变 性 剂 和 助 溶 试 剂 ， 它 能 断 裂 分 子 内 和 分 子 间 的氢 键 ， 使 分 子 去 折 叠 ， 破 坏 蛋 白 分 子 的 二 、 三 级 结 构 。 而 强 还 原 剂 如 巯 基 乙醇，二 硫苏糖醇能 使 半胱氨 酸残基 间 的 二 硫键 断 裂 。 在 样 品 和 凝 胶 中 加 入 还 原 剂 和SDS后 ， 分 子 被解聚 成多肽链， 解聚 后 的 氨 基 酸侧链和 SDS结 合成蛋 白 - SDS胶束， 所带的 负电 荷 大 大 超过了蛋 白 原 有 的 蛋 白 量 ， 这 样 就消除了不 同 分 子 间 的 电荷 差异和 结 构 差异。 SDS-PAGE一 般采用 的 是 不 连续缓冲系统， 于 连续缓冲系统相比， 能 够有 较高的 分 辨率 。 浓缩胶 的 作 用 是 有 堆积作 用 ， 凝 胶 浓度较小 ， 孔径较大 ， 把较稀的 样 品 加 在浓缩胶 上， 经过大 孔径凝 胶 的 迁 移 作 用 而 被浓缩至一 个 狭窄的 区带。 当样 品 液和浓缩胶 选TRIS/HCL缓冲液， 电 极液选TRIS/甘氨 酸。 电 泳 开 始后 ， HCL解离 成氯离 子 ， 甘氨 酸解离 出少量 的 甘氨 酸根 离 子 。 蛋 白 质 带负电 荷 ， 因 此一 起向正极移动， 其 中 氯离 子 最快， 甘氨 酸根 离 子 最慢， 蛋 白 居中 。 电 泳 ...