农药生物测定实验指导 （研究生） 实验一 培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养 一、 实验目的： 1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用； 2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。 二、 实验原理： 培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。 灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1 小时或150℃处理2 小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1 公斤/cm 2左右（相当于121℃） ，维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。湿热灭菌比干热灭菌效率高。 病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。本实验是练习在固体培养基上接种。固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。 接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。 三．主要仪器及试材： 1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA 培养基 [注：以上器皿须经灭菌。] 2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。 四．实验方法与步骤： （一）、培养基的制作： 1、培养基的组成（PDA）： 去皮马铃薯块 200 克 葡萄糖（或蔗糖） 10-20 克 琼脂 17-20 克 水 1000m l 2、步骤： （ 1）、在大烧杯中加入1000m l 的水，作上标记； （ 2）、称取去皮马铃薯200 克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30 分钟左右，将薯块捞出，留下汁液； （ 3）、称取17-20 克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20 克，加入汁液中溶解。 （ 4）、加水至标记处，趁热用双层纱布过滤； （ 5）、将制好的培养基在未凝固前及时分装。 （二）、湿热灭菌： 1、在灭菌锅内加入去离子水到指定...
