基因文库的构建VIP免费

第六章：基因文库的构建第六章：基因文库的构建主要内容：主要内容：11、、基因组文库基因组文库22、、cDNAcDNA文库文库33、、特殊序列文库特殊序列文库44、、酵母人工染色体（酵母人工染色体（PACPAC））基因文库就是随机克隆的集合。基因文库就是随机克隆的集合。一个一个生物体的的基因组DNADNA用用限制性内切酶部分酶切后，将酶部分酶切后，将酶切片段插入到载体切片段插入到载体DNA分子中，所有这些插入了基因组中，所有这些插入了基因组DNDNAA片段的载体分子的集合体，将包含这个生物体的整个基因片段的载体分子的集合体，将包含这个生物体的整个基因组，也就是构成了这个生物体的组，也就是构成了这个生物体的基因文库基因文库。。将这些载体导入到受体细菌或细胞中，这样将这些载体导入到受体细菌或细胞中，这样每个细胞就包含了一个基因组每个细胞就包含了一个基因组DNADNA片段与载体重组片段与载体重组DNADNA分分子，经过繁殖扩增，许多细胞一起包含了该生物全部基因子，经过繁殖扩增，许多细胞一起包含了该生物全部基因组序列，我们将这一个集合体叫做基因文库。组序列，我们将这一个集合体叫做基因文库。基因组文库基因组文库是由一种生物的所有基因组是由一种生物的所有基因组DNADNA构建而成的。构建而成的。cDNAcDNA文库文库是利用从是利用从RNARNA序列反转录序列反转录形成的形成的cDNAcDNA序列构建的。序列构建的。特殊序列文库特殊序列文库是针对某些特殊基因或序是针对某些特殊基因或序列而建立的。列而建立的。构建文库所使用的构建文库所使用的载体主要载体主要有：有：λλ噬菌体噬菌体((噬菌斑噬菌斑))粘粒粘粒((菌落菌落))质粒质粒酵母人工染色体酵母人工染色体((构建高等真核生构建高等真核生物基因文库设计物基因文库设计))基因组文库（基因组文库（GenomicLibrarieGenomicLibrariess））指把某种细胞的整个基因组指把某种细胞的整个基因组DNADNA，按一定长，按一定长短要求，酶解成若干片段，在与适当的载体分短要求，酶解成若干片段，在与适当的载体分子重组后，引入相应宿主细菌的细胞中，形成子重组后，引入相应宿主细菌的细胞中，形成一大批含有重组体一大批含有重组体DNADNA分子的细胞克隆群体。分子的细胞克隆群体。即：含有某种生物全部遗传信息的重组DNA分子的克隆总和建立基因组文库，取决于两项技术系统建立基因组文库，取决于两项技术系统一是具有包装能力的一是具有包装能力的载体系统，，二是二是离体包装系统。。（1）载体系统具有包装能力的载体系统主要有两类：具有包装能力的载体系统主要有两类：λλ噬菌体和粘粒噬菌体和粘粒AA．．λλ噬菌体载体噬菌体载体插入型插入型载体，只有一个可供外源载体，只有一个可供外源DNADNA插入的酶切插入的酶切位点。位点。取代型取代型载体，具有两个酶切位点，两个位点之间的载体，具有两个酶切位点，两个位点之间的DNADNA片段可以被外源片段可以被外源DNADNA取代。取代。取代型载体应用最广泛取代型载体应用最广泛如如λλEMBL1-4EMBL1-4是一类取代型载体系列是一类取代型载体系列BB．粘粒．粘粒粘粒作为载体的特点是：粘粒作为载体的特点是：一般质粒的特性外还能装载大片段的外源一般质粒的特性外还能装载大片段的外源DNADNA，，有可以识别噬菌体包装的有可以识别噬菌体包装的““coscos””位点位点。。包装时，包装时，只有只有能够达到所需片段的分子量标准的重能够达到所需片段的分子量标准的重组子才能被装入噬菌体的外壳内，形成有感染能力组子才能被装入噬菌体的外壳内，形成有感染能力的颗粒。的颗粒。然后，经过转导将外源然后，经过转导将外源DNADNA克隆化，达到建库目的。克隆化，达到建库目的。质粒＋噬菌体质粒＋噬菌体（（22）离体包装系统）离体包装系统AA．对带有外源．对带有外源DNADNA的杂合分子有直的杂合分子有直接筛选和富集的作用。接筛选和富集的作用。BB．提高重组．提高重组DNADNA分子产生克隆的频率分子产生克隆的频率离体包装系统由离体包装系统由两种两种具有具有突变突变的溶源化的溶源化的的大肠杆...