人巨细胞病毒核酸定量核酸检测原则操作规程（荧光PCR法）1.目的规范人巨细胞病毒(HCMV)核酸DNA（荧光PCR法）检测操作流程，精确进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA分析。2.应用范畴使用中山大学达安基因股份有限公司人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒（荧光PCR法）和PE GeneAmp 5700、ABI Prism 7000、ABI Prism 7700等仪器进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA检测。3.职责由PCR实验室制订程序文献，专业技术人员负责执行，实验室主管负责监督实施。4.内容 4.1 实验原理和临床应用本品选用人巨细胞病毒珠（即人疱疹病毒5型）-AD169基因组中编码即刻早期转录调节蛋白的IE1基因的一高度保守的非编码区为扩增靶区域，设计特异性引物及荧光探针，扩增片段长度为86bp,运用实时荧光定量PCR技术，定量检测尿液、乳汁、血清或淋巴细胞样本中人巨细胞病毒DNA。本品用于器官移植、骨髓移植及HIV阳性/AIDS患者尿液、乳汁、血清或淋巴细胞中的人巨细胞病毒(HCMV)感染的检测，用于人巨细胞病毒感染的辅助诊疗和疗效监控，不用于血源筛查。本品检测成果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的根据。4.2标本采集4.2.1 使用标本类型：尿液、乳汁、血清和淋巴细胞4.2.2 标本采集；由合作单位按照下列规定进行采集。4.2.2.1 尿或乳汁：取晨尿或成熟乳1ml于1.5ml的无菌离心管中，离心取沉淀即为标本。标本可立刻用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。4.2.2.2 血清：用无菌注射器抽取受检者静脉血1ml,注入无菌1.5mlEppendoff管，4℃静置过夜。吸取上层血清（注意勿带入红细胞）至另一无菌1.5mlEppendoff管中，即为血清标本。标本可立刻用于测试（48小时以内），也能够保存于-20℃待测，保存期为6个月。4.2.2.3 淋巴细胞：取静脉血（EDTA抗凝）1ml,运用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞即为标本。标本可立刻用于测试，也可保存于4℃待测，保存期为24小时。4.3 试剂准备4.3.1 供应商：中山大学达安基因股份有限公司 4.3.2 此实验试剂应放在冰箱-20℃保存，在实验前5分钟取出备用，实验后应立刻放回冰箱-20℃。4.3.3 如果试剂出现了封口蜡破损造成液体外漏以及过期试剂，应及时更换。4.4 质控品4.4.1 质控品来源：随试剂盒，由厂家提供。4.4.2 质控品保存条件：置于-20℃冰箱中保存。4.4.3 质控频度：每次实验均需做质控。4.5 操作过程阐明4.5.1 DNA提取4.5.1.1 质控品解决：分别取出阴性、阳性质控品，8000rpm离心数秒，各吸50ul至1.5ml灭菌离心管中，...
