石蜡切片及免疫荧光VIP免费

一、石蜡切片1.固定：将新鲜组织切成小块，固定于 4%多聚甲醛过夜。凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。同时能使组织硬化，有利于切片的进行。2 脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为 1 小时。固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。3 透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。材料块在透明剂浸渍过程称透明。4.浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍 1 小时。先后移入 2 个熔化的石蜡液中浸渍 1 小时左右。5.包埋:以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。6 切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。通常切片厚度为 3-5um，用毛笔轻托轻方攵在 37 度水浴中展片。7. 贴片与烤片：—般使用恒温水浴锅，温度控制在 37-40 弋左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于 60 弋恒温箱内干燥 2 小时，蛋白质凝固后即可碍8. 切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。9. 染色:经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精檢紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红檢粉红色。实验操作简单。免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。二、冰冻切片1. 取材：应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。2. 速冻：1）将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约 2cm）。2 ）如组织块小可适量加 OCT 包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内。3）当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约 10-20S 组织即迅速冰结成块。4）在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。5）若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80 弋冰箱贮存备用。3. 固定：1 ）样品托上涂一层 OCT 包埋胶，将速冻组织置于其上，4 弋冰箱预冷5-10min 让 OCT 胶浸透组织。2）取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。3 ）组织置于样品托上，其上再添一层 OCT 胶，以完全覆盖为宜，...