常用作物生理指标测定方法VIP专享VIP免费

SOD,POD,CAT,MDA,可溶性蛋白用同一提取液。 磷酸缓冲液配制：A 液（Na2HPO4 0.2M）:Na2HPO4.2H2O=35.61g(或Na2HPO4.12H2O=71.64g)定容1000ML B 液（NaH2PO4 0.2M）:NaH2PO4.H2O=27.6g(或NaH2PO4.2H2O=31.21g)定容到1000ml 浓度mol/l PH 值 A 液体积ml B 液体积ml 定容体积ml 0.05 7.8 91.5 8.5 400 0.1 7.5 84 16 200 0.1 7.0 61 39 200 0.1 6.0 12.3 87.7 200 1/15 7.0 61 39 300 130mmol/l 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet 用磷酸缓冲液定容至100ml 0.75mmol/l 氮蓝四唑（NBT）溶液：称0.06133gNBT 用磷酸缓冲液定容至100ml 避光保存 0.1mmol/LEDTA-Na2 溶液：取0.03721gEDTA-Na2 用磷酸缓冲液定容至1000ml 0.02mmol/l 核黄素溶液：取0.00753g 核黄素定容至1000ml 避光保存 反应液组成 水：磷酸：Met：NBT：EDTA-Na2：FD=5：30：6：6：6：6 150ml反应液的组成是水12.7ml+磷酸（0.05M,PH=7.8）76.3ml+Met15.25ml+NBT15.25ml+EDTA=Na215.25ml+FD15.25ml SOD：称取0.5g 鲜样，加1ml 磷酸缓冲液（0.05mol/L PH=7.8），冰浴研磨，研磨后再加入1ml 缓冲液倒入离心管，再用2ml 缓冲液冲洗研钵，倒入离心管中，平衡后低温（0-4℃）10000rpm 离心后10min 冷藏保存。取相同型号的试管，加入20μ l 上清液（2 支对照管加缓冲液），分别加3ml 反应液，其中一支对照放于暗处，其余在 4000lux下反应20-30min（温度高时时间短，温度低时时间长）后再560nm 下进行比色。 计算公式：SOD 总活性（units.g-1FW）=(Ack-A)*V/Ack*0.5*W*a(V 酶液总体积4ml，w 样品重=0.5g，a 测定是的酶液体积=0.02ml) POD：取上清液20μ l 加入比色杯中（对照加磷酸），加3ml 反应液，马上读 470nm 下的OD 值并计时，每个 1min 读 1 次（读 0，1，2，3min）的OD 值。 反应液：0.1mol/L，PH=6.0 的磷酸50ml,加入愈创木酚 28μ l，于磁力搅拌器加热溶解，加入30%的H2O219μ l 存于冰箱内。 计算公式：POD 总活性（△OD470/Min.gFW）=△OD470*V/a*W(V=4ml,a=0.02ml,W=0.5g) CAT：取上清液100μl 加入比色杯中（对照加磷酸），加3ml 反应液，马上读240nm 下的OD 值并计时，每个1min 再读一次（读第0，1min 的OD 值）。 反应液：0.1mol/L PH=7.0 磷酸缓冲液20ml，加入0.1mol/LH2O2(5.68ml30%H2O2 定容至1000ml)5ml。 计算公式：CAT 总活性（△OD240/Min.gFW）=△OD240*...