TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology脑立体定位和切片技术TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology脑立体定位技术TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology脑立体定位技术的简单流程TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology动物脑立体定位:利用颅骨的标志/参考点,确定皮层下某些神经结构的位置,利用脑立体定位仪对脑进行定向的刺激、破坏、药物注射、引导电位等研究的技术。主要用途:对神经结构进行定向的:注射(给药)埋管(慢性给药,透析)损毁记录(电生理)TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology前囟(Bregma):位于冠状缝和矢状缝的交界处人字缝尖(lambda):位于后囟人字缝与矢状缝的交汇点TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiologyBregma,前囟TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology动物脑立体定位:利用颅骨的标志/参考点,确定皮层下某些神经结构的位置,利用脑立体定位仪对脑进行定向的刺激、破坏、药物注射、引导电位等研究的技术。主要用途:对神经结构进行定向的注射(给药)埋管(慢性给药,透析)损毁记录(电生理)TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiologyKopf900StereotaxicKopf1404FrameAssembly立体定位仪:TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiologyStereotaxicDrillUnitAdjustableWireKnifeKopf5000MicroinjectionUnitTechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology立体定位仪:TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology游标卡尺原理根据游标上的分度格数,常把游标卡尺分为10分度、20分度、50分度。尺身上的最小分度是1毫米,游标尺上有10个小的等分刻度,总长9毫米,每一分度为0.9毫米,比主尺上的最小分度相差0.1毫米。尺身和游标的零刻度线对齐,它们的第一条刻度线相差0.1毫米。立体定位仪中坐标的读取主尺游标尺TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology游标卡尺按下列规则读数:(1)以游标零刻线位置为准,在主尺上读取整毫米数。(2)看游标上哪条刻线与主尺上的某一刻线(不用管是第几条刻线)对齐,由游标上读出毫米以下的小数。(3)总的读数为毫米整数加上毫米小数。TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology研究实例TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiologyMFB:(1)AP:4.4mm,ML:1.2mm,V:7.8mm;(2)AP:4.0mm,ML:0.8mm,V:8.0mm内侧前脑束(MFB):从基底嗅区、旁杏仁核区和隔核出发投射至下丘脑侧部的一组复杂纤维。MFB的DA能神经纤维相对集中,相对小剂量的6-OHDA注入MFB能造成更多的DA能神经元死亡。TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology[器材和药品]立体定位仪、10%水合氯醛麻醉剂、1ml注射器、手术刀、组织剪、止血钳、牙科钻或骨钻、金属定位针、脱脂棉花、3%双氧水(H2O2)、缝针与缝线、75%酒精[实验动物]雄性SD大鼠,体重约200-300g实验准备TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology[操作步骤]1.立体定位仪的一般校验2.动物麻醉:动物称重后,水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻醉。3.头部固定:(1)插入耳棒:先将一侧耳棒轻轻插入外耳道,碰到骨性外耳道底后固定耳棒,继之同样固定另一耳棒。检查大鼠头部固定是否稳定,松斜,两侧耳棒刻度是否对称,轻移耳棒使两侧刻度一致,头位完全居中,再次固定耳棒。三个标准检测是否固定成功:鼻对正中,头部不动,提尾不掉(2)固定上颌:将大鼠的上门牙塞进上齿固定板的槽内,旋紧螺丝。从各方向推压动物头部,均不应出现移动。通过定位针的测量调节前后囟在同一矢状线上,并使前后囟在同一水平线上。TechniquesinNeurobiologyStateKeyLabofMedicalNeurobiology4.开颅:剪去头部的毛,用碘酒与酒精棉球消毒头部皮肤,沿矢状缝作切口,剥离筋膜及肌肉,推开骨膜,暴露骨缝,并用3%双氧水洗净,止血。5.脑内核团定位:(1)根据脑图谱,确定所要研究神经核团的立体位置(注意:所研究...