细胞凋亡检测方法VIP专享VIP免费

1 细 胞 凋 亡检测方法 一 、 细 胞 凋 亡 的 形 态 学 检 测 1 光 学 显 微 镜 和 倒 置 显 微 镜 （ 1） 未 染 色 细 胞 ： 凋 亡 细 胞 的 体 积 变 小 、 变 形 ， 全 面 皱 缩 ， 细 胞 膜 完 整 但 出 现 发 泡 现象 ， 细 胞 凋 亡 晚 期 可 见 凋 亡 小 体 ， 凋 亡 小 体 为 数 个 圆 形 小 体 围 绕 在 细 胞 周 围 。 贴 壁 细 胞 出 现皱 缩 、 变 圆 、 脱 落 。 （ 2） 染 色 细 胞 ： 姬 姆 萨 （ Giemsa） 染 色 、 瑞 氏 染 色 等 ： 正 常 细 胞 核 色 泽 均 一 ； 凋 亡 细 胞 染 色 质 浓 缩 、边 缘 化 ， 核 膜 裂 解 、 染 色 质 分 割 成 块 状 和 凋 亡 小 体 等 典 型 的 凋 亡 形 态 ； 坏 死 细 胞 染 色 浅 或 没染 上 颜 色 。 苏 木 素 -伊 红 （ HE） 染 色 ： 细 胞 核 固 缩 碎 裂 、 呈 蓝 黑 色 、 胞 浆 呈 淡 红 色 （ 凋 亡 细 胞 ），正 常 细 胞 核 呈 均 匀 淡 蓝 色 或 蓝 色 ， 坏 死 细 胞 核 呈 很 淡 的 蓝 色 或 蓝 色 消 失 。 2 荧 光 显 微 镜 和 共 聚 焦 激 光 扫 描 显 微 镜 一 般 以 细 胞 核 染 色 质 的 形 态 学 改 变 为 指 标 来 评 判 细 胞 凋 亡 的 进 展 情 况 。 常 用的 DNA 特异性染 料有： Hoechst 33342， Hoechst 33258， DAPI。 三种染 料与DNA 的 结合是非嵌入式的 ，主要结合在 DNA 的 A-T 碱基区。紫外光 激 发 时发 射明亮的 蓝 色 荧 光 。 Hoechst是与DNA 特异结合的 活性染 料， 能进 入正 常 细 胞 膜 而对细 胞 没 有太大细 胞 毒作用。 Hoechst 33342 在 凋 亡 细 胞 中的 荧 光 强度要比正 常 细 胞 中要高。 DAPI 为 半通透性， 用于常 规固 定细 胞 的 染 色 。 PI 和Hoechst33342 双标 ： PI、 Hoechst33342 均 可 与细 胞 核DNA（ 或RNA） 结合。 但PI 不能通过正 常 细 胞 膜 ， Hoechst则为 膜 通透性荧 光 染 料， 故细 胞 在 处于坏 死 或 晚 期 调亡 时细 胞 膜 被破坏 ， 这时可 为PI 着红 色...