细胞培养后,需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察
由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,则难以观察其形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能
目前,已有多种研究细胞的技术,从光镜到电子显微镜,从一般细胞化学法到免疫化学法,本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法
第一节 培养细胞的常规检查和观察方法 细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察,及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH 是否变酸、变黄是否更换等
细胞常规检查观察的内容为: 一、肉眼观察 一般常规检查用肉眼即可观察,主要看培养液的颜色和透明度的变化
正常情况下,培养液pH 介于7
4 之间,呈桃红色清亮透明
加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时,随着细胞生长时间的延长,细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH 值下降,引起颜色变浅变黄
在超越缓冲范围后培养液酸化变黄,如不及时调节pH,会影响细胞的生长,甚至造成细胞退变死亡
所以,一旦发现培养液变黄,应及时换液传代
一般更换培养液的时间,依营养物的消耗而定,正常情况生长稳定的细胞2~ 3 天换液一次,生长缓慢的细胞3~ 4天换液一次
培养液中加Hepes 或用5%CO2 温箱培养可使pH 维持稳定,利于细胞生长
用含磷酸盐缓冲系统培养时,可因瓶及塞子漏气,CO2 溢出,也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物,使培养液变碱发红,只致使细胞难以生长,甚至死亡
细胞换液传代后,若发现培养液很快变黄,要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净
贴壁细胞培养时若出现混浊,多为污染
悬浮培养的细胞,应将瓶竖起静置1 小时,若培养基混浊示为污染,也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现
二、显微镜观察 生长良好的细胞,在显微镜下可观察到细胞透明度大,折光性强,轮廓不清
相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构