细 胞 因 子 检 测 细 胞 因 子 是 由 免 疫 细 胞 和 某 些 非 免 疫 细 胞 经 刺 激 而 合 成 、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体内广泛参与免 疫 调节及炎症反应、组织修复、刺 激 造血系统、刺 激 细 胞 的增殖与凋亡等重要生理活动,•在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。某 些 刺 激 因 子 也可导致一些 细 胞 因 子 超量表达,或表达减少,从而 参与疾病的发病及病理过程。 1、免 疫 学检 测 法 其基本原理是 将细 胞 因 子 作为抗原进行定量检 测 。•如免 疫 斑点法、ELISA法、RIA法和 免 疫 印迹法等均已用于细 胞 因 子 的检 测 。 2.、生物学测 定法 其原理是 根据细 胞 因 子 对特定的依赖性细 胞 株(即靶细 胞 )•的促增殖作用,以增殖细 胞 中的 DNA的合 成 或酶活性为指标,间接推算出细 胞 因 子的活性单位,如对 IL-1、IL-2等细 胞 因 子 活性的检 测 。亦可根据某 些 细 胞 因 子 对特定靶细 胞 的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测 定,如对肿瘤坏死因 子 及干扰素的生物活性测 定。 3、分子 生物学测 定法 目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检 测 细 胞 内细 胞 因 子 的基因 组成 或 mRNA量,推算出细 胞 因 子 的合成 量。 一 、IL-1的检测(生物活性测定) 产生 IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。IL-1可分为 IL-1α(•也称酸性 IL-1,pI=5.0)和 IL-1β(中性 IL-1,pI=7.0)。两者的分子量和生物活性相似,•只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。IL-1•的生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10G 4.1细胞增殖法及 L929细胞增殖法等。IL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdR或 125I-UdR的 DNA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。本试验介绍 L929细胞增殖 MTT比色法。 （一 ）IL-1的诱生 体外试验可用 LPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生 IL-1,或用P388D1(鼠),THP-1(人)细胞株制备 IL-1。本试验以小鼠巨噬细胞制备 IL-1。 1、取 6～10周龄 BALB/c或 C57BL/6小鼠,雌雄均可,拉颈处死后用酒精消毒。 2、用带 9号针头的 5ml注射器腹腔注入 5ml冷的含 5％小牛血清的 Hanks液(5•％•NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(...
