转基因小鼠制备实验方法 1、 选取 7~8 周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午 3:00 左右，每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。 2、 47~48 小时后，每只小鼠腹腔注射 HCG(0.8 IU)，并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠(2 月龄以上)作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。 3、第二天上午 9:00 前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。 4、10:30 左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2 液中。显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。 5、仔细观察放在透明质酸酶 M2 液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入 M2 液中洗涤，最后放在 M16 液中放入 5% CO2，37C0 培养箱培养。 6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。 7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片 的中央 滴 入一滴 M2 液，覆 盖 石蜡 油 ，移 入待注射的受精卵。DNA 在注射针中的气 泡 应 在先 前全 部弹 走 。 8、在高 倍 镜下，将注射针轻 触 持卵管，使DNA 缓 慢 流出并控 制其流量 ；反 复 吹 吸受精卵，使其处于最佳 位 置 ，将注射针刺 入受精卵的雄原核，直 至 看 到 原核膨 大 即退 出。将注射过 的和未 注射过 的受精卵上下分 开放置 ，不 致 于混 搅 ，注射完 毕 后，放入 5% CO2，37C0 培养箱培养。 9、将受体麻 醉 ，注射计 量 为 1%戊 巴 比 妥 钠 0.01ml/g，腹腔注射。手术取出卵巢 连 接 输卵管，用脂 肪 镊固 定 ，在显微镜下找 到 输卵管开口。吸取注射后经 培养成 活 的受精卵，吸取方法是先 吸一段 较 长 的 M2，吸一个气 泡 ，然 后吸取受精卵，尽 量 紧 密 排 列 ，再 吸一段 液体，吸一个气 泡 ，再 吸一段 液体，共 四 段 液体三 个气 泡 。除 较 长 的那 段 液体，其余 的液体大 致 1cm左右，气 泡 0.2cm 左右。将移 植 管口插 入输卵管口，轻 轻 将移 植 管内 的液体吹 入，看 到 输卵管壶腹部膨 大 并清晰地 看 到 三 个气 泡 ，即移 植 成 功 。将卵巢 连 同输卵管放回 腹腔，缝 合肌 肉和皮 肤 。 10、受体每隔一个星 期 称 体重 一次 ，当第二次 比 第一次 称 重 增 加 时，即可初 步 判 断怀...
