透明质酸的稳定性考察 郭凤仙 郭学平 李国民 透明质酸(Hyaluronic Acid,简称 HA)是 1934 年 Mayer 发现并命名的。国内外对 HA 的性质、生物活性、生产工艺、临床应用等方面都进行了广泛深入的研究,目前主要应用于医药和化妆品方面。HA 是由糖苷键相连接的氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸的双糖单位重复连接组成的直链聚合物,羧基上的负电荷和较长的可折叠分子链使得分子空间伸展特别大,因此 HA 溶液具有较高的黏度[1],分子量越大,黏度越高。HA 分子链降解后,主要表现为黏度下降。本实验通过改变HA 存放时的温度、酸碱度和离子强度,定期测其运动黏度,对 HA 的稳定性进行了考察。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 恒温水浴(±0.1C);平氏黏度计(毛细管内径为 1.0mm±0.05mm);电热恒温培养箱;电热恒温干燥箱 ;pH 计。 HA,山东福瑞达生物化工有限公司生产,批号 20000217 、20000219; 0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl。 1.2 方法 1.2.1 HA 运动黏度的测定[2] 精密称取按干品计算的 HA 粉末 0.1g 于 100ml 容量瓶中,用蒸馏水溶解定容至刻度,在 25C 恒温水浴中,测定其在平氏黏度计中的流出时间(s),与该黏度计的黏度计常数(mm2/s2)相乘,即得 HA 的运动黏度,以 mm2/s为单位。 1.2.2 温度对HA 稳定性的影响 1.2.2.1 温度对固体HA 稳定性的影响 将HA 配成0.1%(g/ ml)的水溶液,测其运动黏度,作为初始黏度。分别称取HA 固体粉末约1g 于容量瓶中,置4C、28C、40C、60C、80C、100C下恒温保存。一定时间后分别取出,配成0.1%的水溶液,测定运动黏度。 1.2.2.2 温度对HA 溶液稳定性的影响 将HA 固体粉末用蒸馏水溶解,配成0.1%的溶液,分装于容量瓶内,在上述温度下恒温保存,定时取样测定运动黏度,方法同上。 1.2.3 酸碱度对HA 溶液稳定性的影响 取HA 固体粉末1.25g,用 0.9%的NaCl 配成0.25%HA 溶液500ml,调 pH为7,测其运动黏度,作为初始黏度。再将HA 溶液分装于5 个烧杯内,分别用移液管滴加 NaOH 或 HCl 试剂,使溶液pH 值分别为5、6、7、8、9。五个烧杯于80C 下恒温保存 12h 后取出,分别调 pH 值为7.0,补加 0.9%的NaCl或蒸馏水使 NaCl 浓度及 HA 浓度相同,测其运动黏度。 1.2.4 离子强度对HA 溶液运动黏度的影响 取1g HA 固体粉末配成0.2%的溶液500ml,再分别配制 4、3、2、1、0.4、0.2mol/L 的NaCl 溶液各 ...