实验 02、有丝分裂染色体制片及观察 原理 2 环节 1 注意 1二、实验原理 2 有丝分裂是一种持续过程，可分为分裂间期和分裂期，分裂期又分为前期、中期、后期、末期。植物细胞有丝分裂重要在根尖、茎间、芽的生长点、幼叶叶缘及茎间形成层等分生组织，将生长旺盛的植物分生组织通过取材、固定、解离、染色、压片等解决，就能够观察到植物细胞的有丝分裂现象。由于植物根尖容易取材、操作方便，经常被用来进行植物细胞有丝分裂过程的观察：① 根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；② 实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且能够大量获得；③ 对于某些贵重而又稀少的实验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；④ 采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗普通还能够进行正常种植，利于后续研究进行。五、实验办法 11.发根：①水培法②砂培法 取材：上午 10:00～11:00；下午 4:00～ 5:002.预解决 ：将剪下的根尖立刻放入 0.1％秋水仙碱水溶液中，以药液浸没根尖为度，解决 3～4h。克制和破坏纺锤丝的形成，使根尖细胞延迟其染色体的分离，增加中期分裂相，并使染色体分散于细胞中，方便观察计数。3.固定 材料经预解决后用流水冲洗，然后投入卡诺液(3 份甲醇:1 份冰乙酸，现配现用)中固定 20～24h，用 95％的乙醇洗两次，转入 70％乙醇中保存备用。固定的目的是将材料快速杀死，并使染色体形态、构造尽量保持不变和便于染色。4. 解离 惯用酸解法：从 70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗 3min→吸水纸吸干→放入盛有适量1mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离 10min。5.染色与压片（改良石炭酸品红染色）：解离后材料水洗 3min 并吸干，取 1/2 个根尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加 1～2滴染液，染色 10～15min，将滤纸放在盖玻片上，用拇指用力压盖玻片，再用手固定住盖玻片，同时用铅笔的橡皮头在材料部位垂直轻敲几下，使材料分散均匀。6.镜检 普通染色清晰而又分散得较好的分裂相只是少数，因此压片后要认真认真地进行镜检。先在低倍镜下寻找有分裂相的视野，再用高倍镜认真观察、记数或拍照。调节可变光栏与反光镜，使光线明暗适宜，视场亮度适中。注意观察有丝分裂全过程的染色体形态变化，找出染色体分散好的中期细胞进行染色体计数，对好的分裂图像作上标记，方便再观察。七、...
