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MALDI样品制备方法VIP免费

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MALDI-TOF的样品制备¾ 样品制备¾ 基质选择¾ 样品净化样品制备的一般顺序:选择基质制备基质溶液混匀基质和样品制备样品溶液点靶放干100 pmol/µl多聚物10 -100 pmol/µl核酸0.1 - 10 pmol/µl(糖蛋白10 pmol/µl)多肽和蛋白质理想浓度样品类型理想的样品浓度注: 1 pmol/ul = 10-6 M常见的样品制备方法干燥液滴法真空干燥法压碎结晶法快速蒸发法双层法夹心法电喷雾法快速点样法预点基质法先点样品法压片法干燥液滴法操作步骤:• 在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液• 离心,吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中• 加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀• 吸取0.5-2 uL 点靶• 室温自然干燥本法最为常用,适用于大多数情况。干燥液滴法的优缺点优点1.方法简单,适用于很多种样品2.具有较好的耐盐性3.适用于混合物4.可以洗去表面的不挥发性盐份缺点1.使用某些基质(如2,5-dihydroxybenzoic acid )时,结晶不均匀,容易长在液滴的外环边上。2.有些组份与基质不能形成共结晶。真空干燥法操作步骤:•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取0.5-2 uL 点靶•把靶放入真空干燥器内,抽真空到10-2 Torr以下,使溶液快速干燥注:本法是干燥液滴法的一种变体。真空干燥法的优缺点优点 减小结晶颗粒的大小 提高结晶的均匀程度 提高质量准确度和分辨率缺点 效果不总是好于干燥液滴法 需要额外的真空泵 碱金属离子加合峰较强压碎结晶法操作步骤:•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸1 uL基质溶液点到靶上,自然放干•取一块干净的玻璃片盖在基质晶体上按压•轻轻刷去多余的基质碎颗粒•吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL 混合液点到压碎的干燥基质上•室温自然干燥1分钟后,把靶浸入蒸馏水中,以除去不挥发性溶剂•用吸水纸吸去多余水份,自然放干注:本法适用于含有高浓度不挥发性物质(如甘油、尿素、DMSO等)的样品压碎结晶法(简化版)操作步骤:•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸1 uL基质溶液,用枪头在靶上涂刮,自然放干•吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL 混合液点到压碎的干燥基质上...

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