MALDI-TOF的样品制备¾ 样品制备¾ 基质选择¾ 样品净化样品制备的一般顺序：选择基质制备基质溶液混匀基质和样品制备样品溶液点靶放干100 pmol/µl多聚物10 -100 pmol/µl核酸0.1 - 10 pmol/µl(糖蛋白10 pmol/µl)多肽和蛋白质理想浓度样品类型理想的样品浓度注: 1 pmol/ul = 10-6 M常见的样品制备方法干燥液滴法真空干燥法压碎结晶法快速蒸发法双层法夹心法电喷雾法快速点样法预点基质法先点样品法压片法干燥液滴法操作步骤：• 在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液• 离心,吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中• 加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀• 吸取0.5-2 uL 点靶• 室温自然干燥本法最为常用，适用于大多数情况。干燥液滴法的优缺点优点1.方法简单，适用于很多种样品2.具有较好的耐盐性3.适用于混合物4.可以洗去表面的不挥发性盐份缺点1.使用某些基质（如2,5-dihydroxybenzoic acid ）时，结晶不均匀，容易长在液滴的外环边上。2.有些组份与基质不能形成共结晶。真空干燥法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀•吸取0.5-2 uL 点靶•把靶放入真空干燥器内，抽真空到10-2 Torr以下，使溶液快速干燥注：本法是干燥液滴法的一种变体。真空干燥法的优缺点优点 减小结晶颗粒的大小 提高结晶的均匀程度 提高质量准确度和分辨率缺点 效果不总是好于干燥液滴法 需要额外的真空泵 碱金属离子加合峰较强压碎结晶法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸1 uL基质溶液点到靶上，自然放干•取一块干净的玻璃片盖在基质晶体上按压•轻轻刷去多余的基质碎颗粒•吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL 混合液点到压碎的干燥基质上•室温自然干燥1分钟后，把靶浸入蒸馏水中，以除去不挥发性溶剂•用吸水纸吸去多余水份，自然放干注：本法适用于含有高浓度不挥发性物质（如甘油、尿素、DMSO等）的样品压碎结晶法（简化版）操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心，吸1 uL基质溶液，用枪头在靶上涂刮，自然放干•吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL 混合液点到压碎的干燥基质上...
