电脑桌面
添加小米粒文库到电脑桌面
安装后可以在桌面快捷访问

microRNA检测方法VIP免费

microRNA检测方法_第1页
1/9
microRNA检测方法_第2页
2/9
microRNA检测方法_第3页
3/9
microRNA(miRNA)是一种机体内源性表达的单链小分子 RNA,位于基因组非编码区,本身不具有开放阅读框(open reading frame,ORF),具有高度保守性,时序性和组织特异性。miRNA 广泛存在于各种真核细胞中,不编码任何蛋白质,长度仅为 20~24nt。成熟的 miRNA 5′端有一个磷酸基团,3′端为羟基,由具有发夹状结构的约 70~90nt 的单链 RNA前体经过 Dicer 酶加工后形成。成熟的 miRNA 形成 RNA 诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)作用于靶点 mRNA,通过对 mRNA 剪切或抑制其翻译过程而调控基因的表达。目前人们还不明确 miRNA 及其靶 mRNA 之间的作用机制。 最近有研究指出,miRNA 在细胞生长、发育、分化、死亡等生物过程中起着重要的作用,同时,miRNA 参与了血细胞生成、胰岛素分泌、神经系统构成和人类癌细胞生长等不同的过程,因此,非常有必要开发有效的实验工具来测定 miRNA。 目前检测 miRNA 的方法主要有 Northern 印迹分析,微点阵(microarray)分析和实时定量PCR(quantitative Real-Time PCR)。下面将对这三种方法做简单的介绍及比较。 1、Northern 印迹分析(Northern Analysis) Northern 印迹是基于杂交检测 RNA 的常用方法,它是最早用于 miRNA 分析的几种方法之一。这种方法简单易行,大部分实验室都可以进行操作,不需要额外的资金投入与设备更新。 不足之处: 1)Northern 分析的过程涉及大量人工操作,并且每次仅有一条 miRNA 探针与一个 RNA 印迹杂交,因此,它适用于不适用于大规模的筛选实验。尽管如此,在简单探究 miRNA 功能机理的实验中,Northern 印迹分析还是能够满足研究需要的。 2)Northern 印迹分析的动态范围只能达到两个数量级,这就引发了一个严重的问题,进行实验的细胞内的 miRNA 分子的数量要达到比较大的范围,例如,能够检测 40,000 个 miRNA分子每细胞的印迹条件实际上却不能准确检测 10 个 miRNA 分子每细胞。另外,由于Northern 印迹以杂交为原理,它通常不能有效区分具有细微序列差异的 miRNA。例如,同一个家族中的 miRNA let-7c 与 let-7a 和 let-7b 之间仅有一个碱基的差异,导致 Northern 印迹分析无法清晰区分它们。此外,Northern 印迹实验的重复性较弱。 3)Northern 印迹耗时,耗量。进行一次 miRNA 检测需要 3 个工作日,不仅减慢了实验进程,也增加了杂交膜上信号扩散...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在违规,或者侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“违规举报”。

碎片内容

microRNA检测方法

确认删除?
VIP
微信客服
  • 扫码咨询
会员Q群
  • 会员专属群点击这里加入QQ群
客服邮箱
回到顶部