Clontech Xfect 转染试剂操作手册 1 / 6 Xfect 质粒DNA转染试剂 • 操作简便且兼容血清 • 转染效率高 • 细胞毒性极低 • 细胞类型广泛 操作流程图： Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)： 1. 转染前的准备 贴壁细胞: 在转染的前1d，接种1ml合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞融合度能够达到50–80%。 悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer前，将细胞以5 x10e5–1.25 x10e6/1ml接种于6-孔板中培养。 2. 漩涡混匀Xfect Polymer。 3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂： Tube 1 (质粒DNA) ---μl (5 μg) 质粒DNA ---μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积 Tube 2 (Polymer) 1.5 μl Xfect Polymer(100μg/μl) 98.5 μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积 注意: • 上述为6-孔板单孔转染所需的量。 • 每 1μg 质粒 DNA 加 0.3 μl Xfect Polymer。 • 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒 DNA 是最佳使用量。若您是首次使用 Xfect 转染细胞，需要按照 2.5 μg，5 μg和 7.5 μg的质粒 DNA 的量进行梯度实验，确定质粒 DNA 的最优使用量。 实验证明，质粒 DNA 的量不能少于 2.5 μg，不然会造成转染效率低（经转染Hela 细胞实验验证）。 • Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过 30min。 4. 漩涡混匀每管混合物。 5. 将Xfect Polymer预混液和DNA预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec。 6. 室温孵育10 min，形成Xfect/DNA复合物。 7. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。 注意: 无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。 8. 37℃孵育培养板。 Clontech Xfect 转染试剂操作手册 2 / 6 9. 4 hr 后，吸走培养基，向培养板中加入2ml新鲜培养基，再将培养板放回37℃培养箱继续培养，48 hr后检测基因的表达。 Xfect 成人干细胞转染试剂 • 转染效率优于其他竞争产品 • 人间质干细胞的转染效率为67% • 人脂肪干细胞的转染效率99% • 对细胞分化无任何影响 成人干细胞专用 Xfect 质粒 DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)： 1. 转染前1d，接种2ml细胞，不同类型的细胞需要不同的接种密度， 转染时细胞应该达到的融合度： hMSC的融合度为 50–60% hADSC的融合度为 60–70% 2. 室温下解冻Xfect...
