新城疫抗体水平检测

新城疫抗体水平检测OTM[-FDQS58-请填写公司名称新城疫的血凝和血凝抑制试验高若开一、实验目的1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。二、实验内容1.血凝试验（HA）检测新城疫抗原2. 血凝抑制试验（HI）检测新城疫抗体三、实验原理1.血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA），也称直接血凝反应。2.血凝抑制试验（HI）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。红Iamlate!四、实验材料离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96 孔血凝版（5 块）、微量移液器（20-100 微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。五、实验步骤（一）抗凝剂的配制将 1 克柠檬酸钠用 25 毫升生理盐水稀释备用。1 毫升抗凝剂可用于采集 9 毫升血液（二）10%红细胞悬液的配制1、用注射器吸取 0.5 毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞 4.5 毫升。2、1500 转离心 5 分钟，吸弃上清液。3、用 5-10 倍生理盐水 1500 转洗涤 3 次，前两次 5 分钟，后一次 10 分钟4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成 10%红细胞悬液。5、2-6 摄氏度储存，备用。（三）血凝试验（HA）1.在血凝板上第一排的 1—12 孔内各加入 50ul 生理盐水2.将系苗用生理盐水 5 毫升稀释，在第 1 孔内加入 50ul 病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11 孔，最后弃 50ul。3. 每孔加入 1%鸡红细胞悬液 50ul抗4. 轻轻振荡均匀，后放于室温或 37°C 中静置 30 分钟5. 结果判定血凝效价测定1234567891011122X4X8X16X32X64X128X 256X 512X 1024X2048X红细胞对照生理盐水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050弃 50红细胞505050505050505050505050结果++++++++++++++++++++++++++结果判定标准1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即 100%凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即 75%凝集；3、＋＋：红细胞形成一个环状，四...