外周血染色体核型分析VIP免费

外周血染色体核型分析D区，合作共建团队，大客户团队2018.06.23背景知识（Backgroundinformation)染色体与遗传病：GeneticDisease染色体的多变性：Variability染色体的畸变：Aberration多达300多种因染色体异常而导致的遗传疾病46条染色体在不同的人体内存在恒定的微小变异（无表型效应or病理学意义）一定条件刺激下（Eg.药物、射线、病毒或母亲年龄），染色体会发生数目或结构畸变。背景知识(Cont.)染色体畸变–数目改变：Quantitychanges染色体畸变–结构异常：Unusualstructure多倍性：体细胞染色体数目成倍增加。原因：双雄受精，双雌受精，核内复制。非整倍性：体细胞染色体数目增加或少一条或数条。原因：减数分裂染色体不分离或丢失。缺失：染色体臂中段或末端丢失。倒位：某一染色体中间片段发生两个断裂，断片倒转180°后重接。易位：转位，平衡易位，罗伯逊易位简介(Introduction)染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究对象。外周血染色体核型分析可直接在染色体上显示带型，不仅可以检测染色体数目上的变化，而且可以观察到缺失、重复、倒位、异位等结构上的异常，因而其检测可用在遗传病以及产前婚前孕前的诊断上。概念：Concept目的：Purpose染色体核型技术检测（遗传病诊断）：Eg.唐氏综合症(21-3体)，Patau综合症(18-3体)，Edwards综合症(13-3体)。明显体态异常，智力低下，发育障碍，多发畸形或皮纹明显异常，性情异常第二性征异常或外生殖器两性畸形。女性原发性闭经、继发性闭经或男子无精长期接触X线、电离辐射、有毒物质的人员恶性血液病患者简介(Cont.)染色体核型技术检测（产前婚前孕前诊断）：Eg.猫叫综合症（5P综合症),特纳综合症，先天性睾丸发育不良综合症，超雄综合症(XYY综合症)，超雌综合症(XXY综合症)。多发性流产，死胎和不孕不孕的夫妇35岁以上高龄孕妇已生育过染色体异常患儿的夫妇，或双方或一方具有遗传病家族史夫妇双方或一方为可疑或已知的染色体数目或结构异常的患者婚前孕前检查希望进行优生优育检查的人群简介(Cont.)项目介绍(Project)-外周血染色体核型分析临床应用：Application检测方法：Method样本量：Sample染色体异常是导致自然流产、胚胎停止发育，不良孕产史和不孕不育及发育异常的重要原因，对优生优育门诊就诊的患者进行染色体分析，在临床诊断和优生优育方面有重要意义。培养法G显带肝素抗凝全血2.0ml实验原理：TestPrincipal外周血中淋巴细胞在含有植物血凝素(PHA)的培养基中培养68-72小时，进入生长旺盛的有丝分裂期；之后加入秋水仙素抑制纺锤体形成，使其停留在细胞分裂中期；再经过氯化钾溶液低渗、固定、滴片制片、胰酶消化、姬姆萨染色，在油镜下可观察到每个分裂期的染色体形态及数量。项目介绍(Project)-外周血染色体核型分析(Cont.)实验操作：TestProcedure1.接种：先在每瓶含有PHA的5ml培养基的培养瓶中接种0.5ml的外周血，接种2瓶。2.培养：37℃全封闭式培养68-72h。在细胞收获前加入0.1ml浓度为20ug/ml秋水仙素培养1-1.5h。3.细胞的收获：1）用离心机以2200转/分钟离心5分钟后弃上清液。2）加入0.075M的KCl溶液10ml，充分混匀，低渗时间为15-18分钟。3）预固定：低渗后加入固定液1ml充分混匀（固定液是甲醇与冰乙酸按3：1混匀），以2200转/分钟离心7分钟。4）吸弃上清液，加入10ml的固定液，混匀。项目介绍(Project)-外周血染色体核型分析(Cont.)5）用离心机以2200转/分钟离心7分钟，吸弃上清，加入10ml固定液轻轻混匀（两管合一），2200转/分钟离心7分钟。6）弃上清，加入适量的固定液轻轻混匀使成细胞悬液。7）取出在4℃冰水中预冷的清洁玻片，对玻片进行标识，每标记完一块滴片板上的玻片,就回顾一下是否编号准确。8）用吸管吸取细胞悬液在适当的高度滴于预冷的清洁玻片上，玻片的头体尾各一滴即可。9）每滴完一张片后，用纸轻轻将底面擦干，放至滴片柜中，10分钟后拿出贴上细胞遗传小标签。4.烤片：置于75摄氏度烤箱烤3小时。5.染片：在胰酶中消化20-25s，在生理盐水中漂洗，...