微生物限度检查方法验证方案 (1)

微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010 年版二部附录 XIJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。4.验证实施：试验前的准备:试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜(孔径、直径 50mm)、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在 121°C，灭菌 30min，在 3 天内使用。试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基(MUG)等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在 2 小时内，放于湿热灭菌器中，在 121C,灭菌 15min，在 3 周内使用。试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、％无菌氯化钠溶液、%(ml/ml)聚山梨酯 80 的%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在 121°C，灭菌 15min，在 3 周内使用。试验菌的制备和稀释：细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：控制菌检查方法验证用菌液：取上述均匀培养物（菌悬液），用%无菌氯化钠溶液对倍稀释，制成每 1ml 含菌 10〜100cfu 的试验菌液。供试液的制备：根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。，取供试品养胃舒软胶囊 5g，加至含溶化的（温度不超过 45C）5g 司盘80、3g 单硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯 80 无菌混合物的烧杯中，用无菌玻璃搅拌成团后，慢慢加入 45C 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml,边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为 1：20 的供试液。验证试验分 4 ...