专题一基因工程【夯实基础】一.必备知识1．基因工程的基本工具（1）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”① 来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。② 功能：能识别双链 DNA 的某种特定核苷酸序列，且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。（2）DNA 连接酶——“分子缝合针”① 功能：将两个 DNA 片段末端之间的缝隙重新形成磷酸二酯键而连接起来。② 种类：根据 DNA 连接酶的来源，可以分为两类：E・coliDNA 连接酶和 T4DNA连接酶。这两类酶在性质上有差别：E・coliDNA 连接酶只能连接黏性末端，而 T4DNA 连接酶既能连接黏性末端，又能连接平末端（但效率较低）。（3）基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”① 作为载体必须具备的条件：能在受体细胞内稳定保存并大量复制；有 1 个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，以便进行筛选；对受体细胞无害等。② 现在所用的载体主要有两类：一类是细菌细胞质中的质粒，它是一种相对分子质量较小、独立于细菌拟核 DNA 以外的一种小型并能自我复制的环状 DNA 分子，可以独立复制，也可整合到细菌拟核中的大型 DNA 中，随拟核 DNA 复制而同步复制。另一类载体是病毒，包括植物病毒、动物病毒、噬菌体。③ 现在所使用的载体几乎都是经过改建的。2.基因工程的基本操作程序：主要包括四个步骤——目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。3.获取目的基因的方法：（1）从基因文库中获取；（2）利用 PCR 扩增技术；（3）利用 mRNA 反转录形成；（4）从供体细胞直接获取；（5）采用 DNA 合成仪人工合成长度不是很大的、核苷酸序列已知的 DNA 片段4. 基因文库、基因组文库、部分基因文库、cDNA 文库之间的关系基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。基因组文库含有一种生物的全部基因，而部分基因文库含有一种生物的部分基因，二者都是基因文库。cDNA 文库属于部分基因文库，它含有的基因是通过逆转录得到的。5. PCR 技术（1）原理：DNA 复制（2）仪器：PCR 扩增仪（3）过程：目的基因 DNA 受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在 DNA 聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环多次（4）条件：模板、原料、ATP、酶、引物、适宜 pH 和温度（5）结果：目的基因的量成指数...
