下载后可任意编辑分子克隆技术实验操作手册12024 年 4 月 19 日《分子克隆技术》实 验 操 作 手 册李香花 吴昌银 邢永忠华中农业大学生命科学技术学院下载后可任意编辑课程简介分子克隆技术是指 DNA 的无性繁殖技术。分子克隆技术课程主要是针对生物技术专业、生物科学专业、生命科学与技术基地班本科生及生物学类专业讨论生而开设的实验课。实验内容涉及分子克隆的一些基本方法及基本操作技巧，主要包括分子克隆、分子杂交和表示检测三部分分子克隆技术：DNA 重组技术是分子生物学的核心内容。本实验利用质粒载体克隆外源 DNA 片段，经过这个实验大家能够掌握质粒载体的抽提、外源 DNA 的准备、酶切、连接及感受态细胞的制备、连接产物的转化以及阳性克隆子的鉴定和验证等。分子杂交技术：实验室常见的分子杂交技术主要有 Southern blotting，Northern blotting，Western blotting 及 Dot blotting 等。12024 年 4 月 19 日下载后可任意编辑Southern blotting 是经过用一种或多种限制性内切酶消化基因组或其它来源的 DNA，经过琼脂糖凝胶电泳按大小分离酶切所得的片段，随后 DNA 在原位发生变性并从凝胶转移到一固相支持物上（硝酸纤维素膜或尼龙膜）。DNA 转移至固相支持物的过程中各 DNA 的相对位置保持不变，用一定方法(如放射性同位素或 DIG)标记的 DNA 探针与固着在膜上的 DNA 杂交，经 X-光片自显影或显色显现出与探针DNA 互补的 DNA 电泳条带的位置，然后进行分析。本实验要求掌握植物总 DNA 的抽提、质量检测、限制性内切酶操作、DNA 的琼脂糖凝胶电泳、转膜、探针的制备、同位素操作等方面的实验技术。表示检测：在转录水平上讨论和了解基因的表示与调控是分子生物学和基因操作的重要内容。本实验经过 RT-PCR 技术训练学生掌握RNA 的抽提、反转录及 PCR 技术等。22024 年 4 月 19 日下载后可任意编辑分子克隆技术实验课是从事生命科学相关讨论的学生从课堂走进实验室，顺利开展科研工作的必经之路。希望学生经过以上三个实验的综合训练能够为提高实际动手能力和实验自主设计能力打下坚实基础。32024 年 4 月 19 日下载后可任意编辑目 录系列一 分子克隆技术 .................................................................................5实验一 质粒的制备 ......................................................................................5...
