下载后可任意编辑单抗制备流程 1975 年, Kohler 和 Milstein 发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合, 形成的杂交细胞既可产生抗体, 又可无限增殖, 从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不但为医学与生物学基础讨论开创了新纪元, 也为临床疾病的诊、 防、 治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫、 细胞融合、 选择杂交瘤、 检测抗体、 杂交瘤细胞的克隆化、 冻存以及单克隆抗体的大量生产, 要经过几个月的一系列实验步骤, 下面根据制备单克隆抗体的流程顺序, 逐一介绍其实验方法。一、 细胞融合前准备 (一) 免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功, 获得高质量的 McAb 至关重要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫, 免疫方案应根据抗原的特性不同而定。 1.颗粒性抗原免疫性较强, 不加佐剂就可获得很好的免疫效果。下面以细胞性抗原为例的免疫方案: 初次免疫 1×10 ７／0.5ml ip (腹腔内注射) ↓ 2～3 周后 第二次免疫 1×10 ７／0.5ml 下载后可任意编辑ip ↓ 3 周后 加强免疫(融合前三天) 1×10 ７／0.5ml ip 或iv(静脉内注射) ↓ 取脾融合 2.可溶性抗原免疫原性弱, 一般要加佐剂, 常见佐剂: 福氏完全佐剂, 福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起, 研磨成油包水的乳糜状, 放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇, 使沉淀的分枝杆菌充分混匀。 初次免疫 Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射 │ (一般 0.8～1ml 0.2ml／点) ↓3 周后 第二次免疫 剂量同上, 加福氏不完全佐剂皮下或ip │ (ip 剂量不宜超过 0.5ml) ↓3 周后 第三次免疫 剂量同上, 不加佐剂, ip下载后可任意编辑 │ (5～7 天后采血测其效价, 检测免疫效果) ↓2～3 周后 加强免疫, 剂量 50～500μg 为宜, ip 或 iv ↓3 天后 取脾融合 当前, 用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新, 如①将可溶性抗原颗粒化或固相化, 一方面增强了抗原的免疫原性, 另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径, 基础免疫可直接采纳脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂, 提高机体的免疫应答水平, 促进免疫细胞对抗原反应性。(二) 饲养细胞 在制备单克隆抗体过程中, 许多环节需要加饲养细胞, 如: 在杂交瘤细胞筛选、...
