猪用生物制品及相关猪源原辅材料中非洲猪瘟病毒核酸检测方法

猪用生物制品及相关猪源原辅材料中非洲猪瘟病毒核酸检测方法1 适用范围1.1 猪用及采用猪源原辅材料制备的生物制品成品及半成品。1.2 猪源毒种。1.3 猪源细胞及相关制品生产用细胞。1.4 其他猪源原辅材料（如组织、血清、胰酶衍生物等）。2 取样和处理2.1 疫苗2.1.1 活疫苗取至少 2 瓶样品，按瓶签注明头份用适宜稀释液分别稀释成 10 头份/0.2ml，等量混合，取混合液进行核酸提取。2.1.2 灭活疫苗取至少 2 瓶样品，等量混合后进行以下处理。2.1.2.1 油佐剂灭活疫苗取 36 ml 混合疫苗，加入正戊醇 4.0 ml，充分振荡混合 1 分钟， 2～8℃冰箱静置不少于60 分钟，直至油相和水相分离。取水相进行核酸提取。2.1.2.2 水性佐剂灭活疫苗2.1.2.2.1 铝胶佐剂灭活疫苗取混合疫苗 5.0 ml，摇匀，加入 0.25 g 解离剂 CPG-odn（人工合成的寡聚核苷酸） ，放入摇床（200 r/min）37℃解离 1 小时，5000 r/min 离心 10 分钟，取上清液进行核酸提取。2.1.2.2.2其他水性佐剂灭活疫苗直接取混合样品进行核酸提取。2.2 其他生物制品和半成品冻干类制品，按活疫苗进行取样和处理；液体制品及半成品，取至少2 份（瓶）样品，等量混合，取混合液进行核酸提取。2.3 猪源毒种取至少 2 支毒种。冻干毒种，按冻干前体积复溶后等量混合，取混合液进行核酸提取；非冻干毒种，等量混合后直接取混合液进行核酸提取。2.4 猪源细胞除另有规定外， 取至少 2 瓶细胞浓度不少于107.0个细胞 /ml 的细胞悬液进行核酸提取。2.5 其他猪源原辅材料2.5.1 猪组织每种组织，分别取样和处理。 取不少于 2.0 g 组织，研磨后用 5 倍体积灭菌 PBS 悬浮，70℃灭活 30 分钟，4℃下以 2000～3000 g 离心 10 分钟，取上清液进行核酸提取。2.5.2 猪血清每批血清取至少 2 个最小包装的样品， 等量混合，取混合液进行核酸提取。2.5.3 猪胰酶干粉状胰酶，取至少2 份样品，根据使用情况分别配制成不低于2.5%浓度的溶液，等量混合，取混合液进行核酸提取；液体胰酶，取至少2 个最小包装的样品，等量混合，取混合液进行核酸提取。2.5.4 其他猪源衍生物固体、液体或干粉状猪源衍生物，可分别按组织、血清或干粉状胰酶的方法进行取样和样品处理。3 核酸提取3.1 试剂和器材3.1.1 试剂根据核酸提取方法确定，如氯仿、异丙醇、无水乙醇、0.1 mol/l 柠檬酸钠（含 10%乙醇）、 75%乙醇等。3.1.2 仪器核酸含量测定仪；常温台式离...