生理学试验--斑马鱼视动反应讲义VIP专享

斑马鱼视动眼动反应实验目的：观察视觉行为学的表现掌握评判视觉功能的行为学手段实验原理：行为学虽是一门古老的学科，但至今仍是神经生理研究中不可或缺(indispensable) 的一个活跃领域。 经典行为学实验一般不依赖或很少需要精密的测量仪器，而是靠我们去观察和思考。眼动 (optokinetic response, OKR) 和视动 (optomotor response, OMR) 反应均是视觉刺激诱发的运动行为。 脊椎动物从低等的鱼、蛙到高等的灵长类和人都有此行为反应。此现象无需学习训练就易诱导、较稳定、 易观察， 所以作为一种客观指标广泛运用于视觉功能的检测和评价。脊椎动物为了获得对运动图像刺激在视网膜上稳定清晰的成像，通过视觉通路和相应的运动神经参与做出生理性行为的适应调整从而能够对视觉刺激做出良好反应，这些表现涉及视动、 眼动或视动性头震颤(Optokinetic head nystagmus, OKHN) 。如果行为学的表现不正常，可以推测它们的固有神经连接出现异常。斑马鱼具有脊椎动物类似的视觉通路，经典的视觉行为学有眼动反应和视动反应。眼动 ( 光动 ) 反应：斑马鱼在光适应一段时间后会对移动的光栅进行注视，试图确保移动视觉图像能稳定地高分辨地呈现在视网膜上。如果光栅是在一个围绕幼鱼的圆筒上移动时(图1)，斑马鱼的眼睛就会一直追随光栅直到其眼睛不能再转动，然后有一个急速的眼颤动(ocular nystagmus) 以回复到最初水平。之后又进行下一个追随反应，如此循环 。周围视觉环境周期性运动时引起的有规律的眼或头追踪运动( 慢相运动 ) 即为 眼动反应或视动性头震颤。五天龄(5dpf) 的幼鱼视觉系统就已非常成熟(viewed in Bilotta, 2001) ，适合行为学检测。该行为学指标常用于筛选与视功能相关的不同遗传背景或操作的幼鱼。视动反应： 视动反应是指斑马鱼对移动的目标有一种追逐的行为。当将成年斑马鱼放在一个圆形光栅的内部时，斑马鱼对光栅的追随行为会表现为一种圆周性运动(图2)。图 1 眼动反应装置图 2 成鱼视动反应装置实验设备：试剂：30 mm Petri dish，6% methylcellulose（Sigma），Embryo media，Rearing water (见附表 )，海绵，橡皮泥，动脉夹，大头针，7-9dpf 幼鱼，成鱼，计时器，烧杯仪器：OKR apparatus (图 3), 体式镜，视频摄录设备，微波炉，搅拌加热台实验步骤Part 1: 成鱼 OKR 3.0cm3.0cm2cm3cmFig.4 转 速显 示照 明 开关电机 开 关正 反转 开关转速 旋钮通 风开 ...