用正交法测定几种因素对酶活力的影响一、前言正交实验法正交实验法就是利用排列整齐的表- 正交表来对试验进行整体设计、综合比较、 统计分析,实现通过少数的实验次数找到较好的生产条件,以达到最高生产工艺效果。 正交表能够在因素变化范围内均衡抽样,使每次试验都具有较强的代表性,由于正交表具备均衡分散的特点,保证了全面实验的某些要求, 这些试验往往能够较好或更好的达到实验的目的。正交实验设计包括两部分内容: 第一,是怎样安排实验; 第二,是怎样分析实验结果。酶活力酶活力( enzyme activity)也称为酶活性,是指酶催化一定化学反应的能力。 酶活力的大小可用在一定条件下,酶催化某一化学反应的速度来表示,酶催化反应速度愈大,酶活力愈高,反之活力愈低。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。在一般的酶促反应体系中,底物往往是过量的,测定初速度时,底物减少量占总量的极少部分,不易准确检测,而产物则是从无到有,只要测定方法灵敏,就可准确测定。二、实验目的1. 学习并掌握正交法应用原理。2. 采用正交法测定多种因素对酶活力的影响。三、实验原理酶促反应常常同时受到多种因素( 包括激活剂和抑制剂等) 的交互影响,可采用正交法进行综合研究, 即通过少量试验收到更好的效果:多快好省。本实验以正交法同时测定[S] 、[E] 、温度和 pH 值对trypsin活性的影响,以求得酶活最大时相应影响因素的最佳值( 水平) ,并借此初步掌握正交法的使用。四、实验器材和试剂实验器材:①试管②漏斗③温度计④吸管⑤恒温水浴锅⑥分光光度计实验试剂:①2%血红蛋白液 (Hb) ②15%三氯醋酸液 (TCA) ③trypsin酶液④0.04mol/L 巴比妥缓冲液(pH 7, 8, 9) ⑤考马斯亮蓝染液五、实验操作1. 实验设计本实验为四因素三水平(总试验次数34=81),可选用 L9 正交表(仅需 9 次试验 ) ,展开后其特性为均衡搭配(1)每列中水平数 1、2、3 出现次数相同,均为3 次;(2)每两列的横行数对 (1-1/1-2/ ⋯/3 -2/3-3)各出现一次。列号试验号1 2 3 4 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 2. 将各因素及其相应水平参数依次填入得到实验安排表试验号试剂/ml 1 6 8 2 4 9 3 5 7 2%血红蛋白液0.2 0.5 0.8 0.2...