、制备胶体金的准备（一）玻璃器皿的清洁制备胶体金的成功与失败除试剂因素以外玻璃器皿清洁是非常关键的一步。如果玻璃器皿内不干净或者有灰尘落入就会干扰胶体金颗粒的生成，形成的颗粒大小不一，颜色微红、无色或混浊不透明。我们的经验是制备胶体金的所有玻璃器皿先用自来水把玻璃器皿上的灰尘流水冲洗干净，加入清洁液（重铬酸钾 lOOOg,加入浓硫酸 2500ml,加蒸馏水至 10000ml）浸泡24h，自来水洗净清洁液，然后每个玻璃器皿用洗洁剂洗 3〜4 次，自来水冲洗掉洗洁剂，用蒸馏水洗 3〜4 次，再用双蒸水把每个器皿洗 3〜4 次，烤箱干燥后备用。通过此方法的处理玻璃器皿不需要硅化处理，而直接制备胶体金。也可用已经制备的胶体金溶液，用同等大不颗粒的金溶液去包被所用的玻璃器皿的表面，然后弃去，再用双蒸水洗净，即可使用，这样效果更好，因为减少了金颗粒的吸附作用。（二）试剂的配制要求按照 Frens 法还可以制备出其它不同颗粒大小的胶体金出来。许多研究证明用该法制备胶体金时金颗粒的大小是柠檬酸三钠用量的函数，基本的规律是柠檬酸三钠用量多，胶体金颗粒直径小，柠檬酸三钠用量越少，腔体金颗粒直径越大。（1）所有配制试剂的容器均按以上要求酸处理洗净，配制试剂用双蒸馏水或三蒸馏水。（2）氯化金（HauCl 水溶液的配制：将 lg 的氯化金一次溶解于双蒸水中配成 1%的水溶液。4放在 4”c 冰箱内保存长达几个月至 1 年左右，仍保持稳定。（3）白磷或黄磷乙醚溶液的配制：白磷在空气中易燃烧，要格外小心操作。把白磷在双蒸水中切成小块，放在滤纸上吸于水份后，迅速放入已准备好的乙醚中去，轻轻摇动，等完全溶解后即得饱和溶液。储藏于棕色密闭瓶内，放在阴凉处保存。柠檬酸三钠还原法(Frens1973)此方法是由 Frens 在 1973 年创立的，制备程序很简单，胶体金的颗粒大小较一致，广为采用。该法一般先将 0.01%的 HAuCl 溶液加热至沸腾，迅4速加入一定量 1%柠檬酸三钠水溶液，开始有些蓝色，然后浅蓝、蓝色，再加热出现红色，煮沸 7〜10min 出现透明的橙红色。各种颗粒的胶体金制备详见表 5-2。表 5-2 柠檬酸三钠用量与胶体金颗粒直径的关系0.01%的 HAuC—(ml)1%柠檬酸三钠(ml)直径(ml)1005.010.01004.015.01001.525.01001.050.01000.7560.01000.6070.01000.4298.01000.32147.01000.25160溶液内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子。目前常用的还原剂有：白磷、乙醇、过氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸...
