下载后可任意编辑铁皮石斛组织培育方案报告一、实验目的了解铁皮石斛培育的方法和步骤, 熟练掌握外植体的取材、 消毒、 接种、 初代培育的操作过程。二、实验器材超净工作台、 高压灭菌锅、 电磁炉、 长镊子、 培育皿、 酒精灯、 接种工具、 烧杯、 玻璃棒、 移液管、 培育箱、 剪刀、 培育瓶等。三、实验步骤配方: 根据不同阶段, 培育基配方有所差异。如表 1表 1 各种培育基配方不同阶段培育基备注愈伤组织( 原球茎) 的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH =5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.6配制( 以 1000ml 幼株的生根壮苗培育基为例) 10% 香 蕉 ( w/w) +MS +3% 蔗 糖 ( w/w) +0.8% 琼 脂 ( w/w) +2.0mg/L NAA1) 量取 800ml 蒸馏水于干净的大烧杯中, 加热至沸腾; 2) 准确称量 100g 香蕉果肉, 切成碎片状, 并倒入上述烧杯中, 加热煮沸 5min, 其间搅拌使之充分溶解; 3) 根据大量、 微量、 Fe2+盐、 有机Ⅰ、 有机Ⅱ顺序, 量取 MS 各种母液于盛有 50ml 蒸馏水的烧杯, 混合均匀; 4) 将 2) 和 3) 的溶液混合, 然后加入 30g 蔗糖, 并移取 2ml 下载后可任意编辑NAA( 0.1mg/ml) , 混合均匀; 5) 加热至沸腾, 加入 8g 琼脂并煮沸 5min, 其间不断搅拌使之充分溶解; 6) 冷却至 50±5℃时, 调 pH 至 5.4—5.6。分装于培育瓶内, 33.3ml/瓶。注意事项: ① 溶解香蕉的蒸馏水尽可能多, 以确保香蕉各种成分完全溶解; ② 各种母液混合时, 要根据大量、 微量、 Fe2+盐、 有机Ⅰ、 有机Ⅱ的顺序; ③ 煮沸时, 小心溶液溢出; ④ 分装时不要污染培育瓶瓶口。灭菌: 1) 检查灭菌锅的水位、 电源、 排气阀、 排气管、 安全阀以及压力表, 确保灭菌锅各指标和功能的正常, 以防事故发生; 2) 把带灭菌的培育基装入锅内, 盖上锅盖, 对称而均匀地扭紧螺丝; 3) 打开电源和排气阀, 调节电压至 220V; 4) 待排气阀排除水蒸气 30s—1min 后, 关闭排气阀; 5) 当温度上升到 121℃后, 调节电压至 135V, 保持 20min; 6) 关闭电源, 使之自动降温至 0℃。10min 后, 打开排气阀和锅盖; 7) 5—10min 后, 取出培育基放于试验台上冷却, 待用。表 2 灭菌时间统计阶段单锅灭菌( 耗时...
