细胞冻存和复苏细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、 经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。冻存和复苏的原则冻存细胞的理论基础当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果 缓慢冷冻 ，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融 ，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。细 胞 冻 存 方 法预先配制冻存液：20%血清培养基10%DMSO （二甲基亚砜）取对数生长期细胞1ml 于冻存管中，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×106—5×106 细胞 /ml)，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。慢 冻 程 序标准程序（ 放哪里？ ）当温度在 -25 ℃以上时， 1-2 ℃/min 当温度达 -25 ℃以下时， 5-10℃/min 当温度达 -100℃时，可迅速放入液氮中简易程序将冻存管于 4℃放置 1 小时，于-20℃放置 1 小时，通过线绳将装有冷冻管的纱布袋固定于液氮罐罐口（-70℃），放置 1 小时，后直接投入液氮中（ -196℃）细 胞 复 苏 方 法从液氮中取出冻存管， 迅速投入 37℃水浴中，使其融化（1 分钟左右）注意防护（冻存管爆炸） ！5 分钟内用培养液稀释至原体积的10 倍以上低速离心 10 分钟去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞低温保护剂的应用在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂， 可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。注意事项：在使用 DMSO 前，不要对其进行高压灭菌，因其本身就有灭菌作用。高压灭菌反而会破坏其分子结构， 以致降低冷冻保护效果。 在常温下，DMSO 对人体有毒，故在配制时最好带手套。在将细胞冻存管投入液氮时，动作要小心、轻巧，以免液氮从液氮罐内溅出。若液氮溅出，可能对皮肤造成冻伤。操作过程中最好带防冻手套、面罩、工作衣或防冻鞋。应注意控制冻存细胞的质量。 既要在冻存前保障细胞具有高活力，还要确保无微生物污染，这样的细胞才具有冻存价值。另外，在每批细胞冻存一段时间后，要复苏1～2 管，以观察其活力以及是否受到微生物的污染。冻存管宜采用塑料冻存管，不宜使...
