细胞试验方法原理

一、细胞培养：1. 细胞培养： 从活的机体中取出组织或细胞，分散成单个细胞，模拟机体内的生长条件，在体外建立无菌、 适温和一定营养条件等，使其在体外环境中继续生长繁殖的过程，并维持其结构和功能的技术。2. 细胞培养的基本条件：无菌条件、细胞生长条件、细胞检测条件、细胞保存条件。3. 无菌条件：1）净化工作室： 净化工作间是基于无菌条件下进行细胞培养操作的场所，设计标准为万级，专供细胞培养、冻存以及细胞治疗用。①细胞培养间：一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。每周乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒②洁净层流罩：层流罩是可提供局部高洁净环境的空气净化的设备。主要由箱体、风机、初效空气过滤器、中效空气过滤器、高效空气过滤器、阻尼层、灯具等组成。③传递窗： 该装置是一种洁净室的辅助设备，主要用于洁净区与非洁净区之间小件物品的传递，以减少洁净室的开门次数，把对洁净区的污染降低到最低程度。④无尘服层流净化细胞培养室的总体要求：经济、有序、高效、安全。相关制度：I.准入制度：没有经过培训的人员不得单独进入净化室工作。进入净化室后要保持安静，不得大声喧哗。II. 安全制度： 谨慎使用酒精灯，实验人员自觉维护室内设备的安全使用，对室内的仪器如CO2 孵箱等要经常注意机器运转情况，发现问题及时检修或报告请人检修。离开时断开必要的仪器电源。III. 卫生消毒制度：一般情况下细胞间每天消毒一次，方法为紫外线消毒（每次30 分钟至1 小时）一次，另外每周用10％乳酸在紧闭门窗下熏蒸30 分钟；实验完毕应及时清理所用物品，注意台面整洁；层流净化室实施值日生负责制。IV .出入制度：总体原则为进出净化室应按次序开、关门，只有将前面打开的门关闭后才允许打开下一个门，使缓冲间起到应有的作用。所有进出层流净化细胞培养室的物品均应通过传递窗进行，紫外灯照射15 分钟2）无菌操作的仪器设备：①超净工作台： 工作原理是利用鼓风机驱动空气经过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。使用前开启柜内紫外灯照射10－30 分钟，预工作 10－15 分钟，以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态。使用完毕后，要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净。②生物安全柜：既能使操作造成无菌、无尘的局部空气环境，保证检验、检测不受污染，又能保证被研究的对象（如病菌、细菌等...