生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.1. 学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；1.2. 了解电泳技术的一般原理；1.3. 掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。二、实验原理2.1. 血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在 pH8.6 的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（ Albumin) 、α 1- 球蛋白、 α 2- 球蛋白、 β - 球蛋白、 γ - 球蛋白 5 条区带。2.2. 血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％清蛋白 4.64 69,000 57～72 α 1－球蛋白 5.06 200,000 2～5 α 2－球蛋白 5.06 300,000 4～9 β －球蛋白 5.12 90,000～150,000 6.5～12 γ －球蛋白 6.85～7.3 156,000～950,000 12～20 缓冲液 pH=8.6，pI ＜pH。血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。预测血清蛋白电泳区带图血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α 1、α 2、β 、γ 五个区带2.3. ①膜条经过氨基黑10B 染色后显出清晰色带； ②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。三、材料与方法：3.1. 实验材料：3.1.1. 实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥- 巴比妥钠缓冲液（ pH8.6，离子强度0.06mol/L ）；③氨基黑10B 染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH溶液。3.1.2. 实验器材： ①V-1100 分光光度计 （× 1）；②恒温水浴箱 （× 1）；③试管（×6）、试管架（× 1）；④ 1000μ L 加样枪（× 1）、加样枪架（× 1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度 120μ m）；⑥培养皿（× 5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（× 2）；⑨剪刀（× 1）；⑩电泳槽（× 1）；? 直流稳压电泳仪（× 1） 3.2.实验步骤1．准备与点样：①取2×8cm的膜条；②亚光面距一端1.5cm 处取一点样线；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。点样示意图：注意：点样线尽量点得细窄而均匀。...
