1 课题 3 血红蛋白的提取和分离【学习目标 】1、简述蛋白质提取和分离的基本原理2、理解蛋白质提取与分离的实验操作过程【重点与难点 】重点：蛋白质提取和分离的基本原理难点：蛋白质提取与分离的实验操作（凝胶色谱操作）过程【知识链接 】1.血红蛋白存在于何种细胞？其特性和作用分别是什么？2.为何不选用鸡血做实验材料？3.分离不同种类蛋白质的依据是什么？【自主学习内容一】基础知识（记忆）1．凝胶色谱法：凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道， 相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时的速度不同，相对分子质量较小的蛋白质由于能够路程较，移动速度；而相对分子质量较大的的蛋白质，只能在移动，路程，移动速度。2．缓冲液缓冲液通常是由1～2 种缓冲剂（如NaHCO3、（NH4）2SO4）溶解于水中配制而成；其作用是。3．电泳：电泳是指电泳利用了待分离样品中各分子以及，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和。在测定蛋白质分子量时通常使用，其中 SDS的作用是，。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率取决于它以及等因素。【自主学习内容二】实验操作（凝胶色谱法 ）1. 蛋白质的提取和分离一般分四步：、、和。2. 样品处理（1）红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是采集的血样要及时通过采用的方法使红液分层，用胶头吸管吸出上层透明的黄色，将下层红细胞倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌低速离心，如此重复三次，直到，表明红细胞忆洗涤干净。注意：离心转速及2 离心时间不能过长，否则，达不到分离效果。（2）血红蛋白的释放：原理是当外界溶液浓度低于细胞内液浓度时，细胞，红细胞由于没有的保护，而，释放出血红蛋白；使用的试剂是。（3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4 层。第一层为无色透明的，第 2 层为白色薄层固体，是，第 3 层是红色透明的液体，这是，第 4 层是红细胞破碎物沉淀物（其他杂质，呈色）。将试管中的液体用滤纸过滤，除去，于分液漏斗中静置片刻后，分出层的红色透明液体。（4）透析：取2mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质量浓度为中（ pH 为），透析 12h。透析可以去除样品中的杂质，或用于。3．凝胶色谱操作首先要；第二步是，因为，因此装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需的凝胶量。 在装填凝胶柱时，不得有，避...
