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血红蛋白的提取和分离习题带答案

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1 课题 3 血红蛋白的提取和分离【学习目标 】1、简述蛋白质提取和分离的基本原理2、理解蛋白质提取与分离的实验操作过程【重点与难点 】重点:蛋白质提取和分离的基本原理难点:蛋白质提取与分离的实验操作(凝胶色谱操作)过程【知识链接 】1.血红蛋白存在于何种细胞?其特性和作用分别是什么?2.为何不选用鸡血做实验材料?3.分离不同种类蛋白质的依据是什么?【自主学习内容一】基础知识(记忆)1.凝胶色谱法:凝胶色谱法也称做,是根据分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由构成的多孔球体,在小球体内部有许多贯穿的通道, 相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时的速度不同,相对分子质量较小的蛋白质由于能够路程较,移动速度;而相对分子质量较大的的蛋白质,只能在移动,路程,移动速度。2.缓冲液缓冲液通常是由1~2 种缓冲剂(如NaHCO3、(NH4)2SO4)溶解于水中配制而成;其作用是。3.电泳:电泳是指电泳利用了待分离样品中各分子以及,使带电分子产生不同的,从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和。在测定蛋白质分子量时通常使用,其中 SDS的作用是,。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率取决于它以及等因素。【自主学习内容二】实验操作(凝胶色谱法 )1. 蛋白质的提取和分离一般分四步:、、和。2. 样品处理(1)红细胞的洗涤:洗涤红细胞的目的是采集的血样要及时通过采用的方法使红液分层,用胶头吸管吸出上层透明的黄色,将下层红细胞倒入烧杯,再加入,缓慢搅拌低速离心,如此重复三次,直到,表明红细胞忆洗涤干净。注意:离心转速及2 离心时间不能过长,否则,达不到分离效果。(2)血红蛋白的释放:原理是当外界溶液浓度低于细胞内液浓度时,细胞,红细胞由于没有的保护,而,释放出血红蛋白;使用的试剂是。(3)分离血红蛋白溶液:将搅拌好的混合溶液离心后,试管中的溶液分为4 层。第一层为无色透明的,第 2 层为白色薄层固体,是,第 3 层是红色透明的液体,这是,第 4 层是红细胞破碎物沉淀物(其他杂质,呈色)。将试管中的液体用滤纸过滤,除去,于分液漏斗中静置片刻后,分出层的红色透明液体。(4)透析:取2mL的血红蛋白溶液装入中,将透析袋放入盛有300mL的物质量浓度为中( pH 为),透析 12h。透析可以去除样品中的杂质,或用于。3.凝胶色谱操作首先要;第二步是,因为,因此装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需的凝胶量。 在装填凝胶柱时,不得有,避...

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