试验1大肠杆菌的培养和分离

实用精品文献资料分享实验 1 大肠杆菌的培养和分离实验 1 大肠杆菌的培养和分离――基础知识和操作过程梳理一、大肠杆菌细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核，细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同， 细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。大肠杆菌是革兰氏阴性、 异养兼性厌氧型肠道杆菌。 在肠道中一般对人无害，但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的受体细胞。二、培养基配置微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物， 但不一定需要外界补充， 有的微生物可以自身合成。 在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。我们一般用 LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌， 培养后可在 LB 固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤：1．称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5g ，酵母提取物 0.25g ，氯化钠 0.5g ，加水 50ml。配置 LB固体培养基时还需加1g 琼脂。实用精品文献资料分享2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置 LB固体培养基时还需加琼脂， 整个过程不断用玻棒搅拌， 目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。3．调 pH：用 1mol/L NaOH溶液调节 pH至偏碱性。4．灭菌：在两个 250ml 的三角瓶中分别装入50ml LB 液体培养基和50ml LB 固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内， 1kg 压力灭菌 15min。5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰； ③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿， 立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在...